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前列腺内原位肿瘤注射将与前列腺组织组织型相匹配的肿瘤细胞直接输送到受体动物的前列腺中。
首先,准备仰卧位的麻醉雄性小鼠。做一个腹部中线切口,解剖内部肌肉组织,露出腹腔。找到其中一个前列腺前叶。这些前列腺叶附着在精囊的小曲率上,靠近膀胱。
现在,将与所需基底膜基质混合的前列腺癌细胞冷冻悬浮液注射到前列腺前叶的长轴中。确保细胞悬液完全输送并轻轻缩回针头。让基质凝固并将细胞嵌入其中。
随后,将前列腺叶连同精囊一起放回腹腔。缝合手术切口。让鼠标恢复。每周检查小鼠以观察前列腺前叶内原位肿瘤的生长。
确认对脚趾捏没有反应后,在老鼠的眼睛上涂抹药膏,并剃掉动物腹部的所有皮毛。使用无菌不粘附垫用三轮手术磨砂膏对暴露的皮肤进行消毒,然后使用无菌酒精湿巾。当皮肤干燥时,将小鼠仰卧位放在干净的表面上,加热垫上方的加热垫正下方,并在腹部切出一个小孔的无菌单覆盖动物。
沿着阴茎和包皮腺上方的腹部中线在外皮和内腹部肌肉组织上做一个 1 厘米的切口。找到双侧精囊和附着的前列腺前叶之一,这些囊泡通常位于后部、外侧,略高于膀胱。请助手将 Myc-CaP 基质胶癌细胞溶液与温和移液混合,并将 30 微升细胞缓慢吸入连接到 50 微升注射器的 28 号针头中。
然后,使用 Graefe 组织镊子,轻轻抬起一个精囊的尖端,在不刺穿囊泡的情况下在组织上产生张力,并小心地将针的斜角平行于前列腺前叶的长轴插入。将整个体积的细胞缓慢注射到肺叶中,然后缓慢缩回针以防止渗漏。
成功的注射将通过前列腺内叶的充血来显现。小心而稳定地将精囊和注射的前列腺叶维持在小鼠外部约30秒,以使基质胶在肺叶内部分凝固。使用无菌聚酯尖端涂抹器收集任何渗漏到腹部的细胞溶液,以防止非原位肿瘤发展。
准确的前列腺内注射对于原位肿瘤的发展至关重要。格外小心避免刺穿精囊,缓慢注射癌细胞悬液,并收集任何细胞渗漏物,将增加此手术的成功率。
现在,轻轻地将精囊和注射的精叶返回腹部,不要对精叶施加压力,并更换任何外化组织。使用 5-0 vicryl 可吸收反向切割针缝合线,用连续缝合内腹部肌肉组织,然后使用 4-0 尼龙单丝不可吸收反向切割针缝合线以间断缝合合腹部外层皮肤。
然后,进行术后镇痛,并将小鼠放在没有垫料的笼子中,中间放在加热垫上,并进行监测,直到完全恢复。