前列腺内注射癌细胞：建立原位前列腺癌小鼠模型的癌细胞递送技术

前列腺内原位肿瘤注射将与前列腺组织组织型相匹配的肿瘤细胞直接注入受体动物的前列腺腺体中。

首先，将一只麻醉的雄性小鼠置于仰卧位。沿腹部中线做一切口，解剖内层肌肉组织以暴露腹腔。找到其中一个前前列腺叶。这些前列腺叶附着于精囊的较小弯曲处，且靠近膀胱。

现在，将预冷的前列腺癌细胞悬液与所需的基底膜基质混合后，注入前列腺前叶的长轴方向。确保细胞悬液完全注入，并轻柔撤出针头。静置，使基质凝固，从而将细胞包埋其中。

随后，将前列腺叶连同精囊一起放回腹腔内。缝合手术切口。让小鼠恢复。每周观察小鼠一次，以监测前叶前列腺内原位肿瘤的生长情况。

确认小鼠对脚趾夹捏无反应后，将眼药膏涂抹于小鼠眼睛，并剃除动物腹部所有毛发。使用无菌非粘连垫进行三轮外科擦洗，随后用无菌酒精擦拭巾消毒暴露的皮肤。待皮肤干燥后，将小鼠仰卧置于加热垫上方的清洁表面上，位置位于洁净手术显微镜物镜正下方，并用无菌手术单覆盖动物身体，仅在腹部区域留出一个小孔。

在阴茎和包皮腺上方腹部中线处的外皮和内腹肌上做一个1厘米长的切口。找到一侧成对的精囊及其附着的前前列腺叶，它们通常位于膀胱的后方、外侧并略偏上方。请助手用移液器轻轻吹打混合Myc-CaP Matrigel癌细胞悬液，并缓慢吸取30微升细胞至连接在50微升注射器上的28号针头中。

然后，使用格雷夫组织镊轻轻提起一侧精囊的尖端，使组织产生张力但不刺破精囊，小心地将针头斜面平行于前叶前列腺长轴方向插入。缓慢将全部细胞悬液注射至腺叶内，随后缓慢退出针头，以防止液体渗漏。

成功的注射可通过前列腺内侧叶的肿胀显现。小心而稳定地将精囊和已注射的前列腺叶保持在小鼠体外约30秒，以使Matrigel在叶内部分凝固。使用无菌聚酯头涂抹棒收集可能泄漏至腹腔的细胞溶液，以防止异位肿瘤的形成。

准确的前列腺内注射对于原位肿瘤的形成至关重要。额外注意避免刺破精囊，缓慢注射癌细胞悬液，并收集任何漏出的细胞，将提高该操作的成功率。

现在，轻柔地将精囊和注射过的叶恢复至腹腔内，避免对叶施加压力，并复位任何外露的组织。使用5-0薇乔可吸收反向切割缝合针线，以连续缝合方式关闭腹腔内层肌肉组织，随后使用4-0尼龙单股不可吸收反向切割缝合针线，以间断缝合方式关闭腹腔外层皮肤。

然后，给予术后镇痛，并将小鼠置于加热垫上的一半无垫料笼中，持续监测直至完全恢复。