0 次观看 • 4:33 分钟 • April 30th, 2023
为了获得耐化学药物的细胞，首先取人前列腺癌细胞悬液接种于培养瓶中。将培养瓶进行孵育，以促进细胞贴壁及其分裂形成单层细胞。
以最佳浓度的抗癌药物溶液处理细胞，并进行孵育。药物分子进入细胞后，可诱导敏感细胞发生凋亡。
某些细胞表达特殊的药物外排转运蛋白或泵，可周期性地将药物排出。这种机制可防止药物在细胞内蓄积，从而使这些细胞能够耐受抗癌药物的作用，产生化学耐药性。
吸除含有药物和碎片的培养基，加入新鲜的无药生长培养基以支持耐化疗细胞的生长。弃去用过的培养基。用胰蛋白酶消化细胞使其从培养瓶上脱落，并转移至离心管中。
离心试管以沉淀细胞。弃去含有胰蛋白酶的上清液。用新鲜培养基重新悬浮细胞。将细胞在新的培养瓶中进行培养。
随后，重复药物处理和细胞培养步骤，使耐药细胞暴露于逐渐增加的相同抗癌药物剂量中。该技术通过清除所有敏感细胞，筛选出培养物，从而获得一群高度耐药的存活细胞。
开始此实验步骤时，将DU145或22Rv1细胞接种于含有20毫升培养基的150平方厘米培养瓶中。24小时后，当细胞融合度达到约70%至80%时，加入5纳摩尔的多西他赛。
72 小时后，吸除含药物的培养基，加入新鲜的不含多西他赛的培养基。每 3 至 4 天更换一次培养基，等待 1 至 2 周，直至培养瓶中出现克隆。吸除培养基。用 15 毫升 PBS 轻柔洗涤细胞，然后加入 4 毫升 0.05% 胰蛋白酶-EDTA，在 37 摄氏度孵育 3 至 5 分钟，使细胞从培养瓶表面脱落。随后，用 8 毫升新鲜培养基重悬消化后的细胞。
将所有处理过的培养瓶中的细胞汇集，并通过离心形成细胞沉淀。随后，弃去上清液。用20毫升新鲜培养基重悬细胞沉淀，并将细胞接种至150平方厘米的培养瓶中。
24小时后，当细胞融合度达到约70%至80%时，再次加入5纳摩尔的多西他赛。重复此前所示的操作步骤，直至克隆在培养瓶中出现。随后，再次将细胞接种至150平方厘米的培养瓶中。
24小时后，当细胞融合度达到约70%至80%时，用10纳摩尔的多西他赛处理细胞。以多西他赛剂量递增的方式重复相同步骤，并在每次浓度处理后持续收集存活的克隆。此过程结束后，即可获得一池可用于实验的耐药细胞。