功能化疗耐药性表征：利用克隆形成实验评估癌细胞药物耐药性的方法

为了评估癌细胞的化疗耐药性，首先取一块多孔板。将所需浓度的药物敏感型前列腺癌细胞悬液接种到部分孔中，将相应药物耐药型细胞悬液接种到其余孔中。

孵育培养物，以促进细胞贴附于培养板。用一系列浓度递增的选定药物溶液处理两种细胞类型。药物分子进入敏感细胞，并即使在最低浓度下也会导致细胞死亡。然而，耐药细胞通过特异性的药物外排泵将药物分子排出，从而在暴露于较高药物浓度的情况下仍能存活。

吸除含有碎片和药物溶液的旧培养基，补充新鲜的无药物完全培养基。孵育培养物，使存活的耐药细胞增殖并形成克隆集落。加入适当的染色溶液对活细胞克隆进行染色。

洗涤培养物以去除多余的染料。计数每个孔中着色菌落的数量。含有药物敏感细胞的孔中存活的菌落数量极少。相比之下，含有药物耐药细胞的孔中菌落数量较多。然而，随着药物剂量的增加，这些耐药细胞的菌落数量会减少。

在此步骤中，使用6孔板，每孔加入2毫升培养基，接种2,000个细胞。24小时后，向DU145和22Rv1细胞系中分别加入浓度递增的多西他赛。设一孔仅加入与最高浓度多西他赛处理组等体积的DMSO作为对照。72小时后，吸除含药物的培养基，更换为新鲜的不含多西他赛的培养基。

将培养板孵育1至2周，直至在显微镜下可见菌落。染色菌落时，在组织培养罩或通风橱内，先用2至3毫升PBS轻轻洗涤菌落，然后加入2至3毫升结晶紫溶液孵育20分钟。

随后，移除染色液，并用 2 至 3 毫升水清洗平板。然后，去除水分并让平板在空气中干燥。拍摄平板的数字图像用于图示。通过观察孔内情况，在记号笔辅助下手动计数菌落，并以图表形式表示细胞存活率的百分比。