用于传代与运输的类球体分割：小肠神经内分泌肿瘤类球体的扩增与转移操作流程 关键词：类球体分割，传代培养，运输，小肠神经内分泌肿瘤，三维培养，类器官，肿瘤模型

类球体是由细胞在体外自我聚集形成的三维球状结构的培养物。培养肿瘤类球体时，应从已接种于培养板中合适细胞外基质（ECM）内的类球体开始。

使用微量移液器进行吹打，以机械方式破坏细胞外基质（ECM）并分散类球体。将类球体-ECM混合物转移至微量离心管中。

以低速离心，使类球体沉淀，并与上清液中的细胞外基质（ECM）分离。弃去含有废弃ECM的上清液。将含有类球体沉淀的离心管置于冰上，以防止后续步骤中ECM凝固。

向沉淀中加入新鲜液化的细胞外基质（ECM）。传代培养时，通过反复吹打混匀内容物，以解离球状细胞并使其释放到悬浮液中。

将含有球体形成细胞和细胞外基质（ECM）的混合物接种至新的培养皿中。ECM 凝固，从而将肿瘤细胞包埋其中。加入所需的生长培养基，孵育以促进被包埋细胞生长形成新的球体。

出于运输目的，将类球体-细胞外基质混合物转移至培养瓶中。让细胞外基质凝固，从而将类球体包裹在其中。

用培养基充满培养瓶，以避免细胞剪切并维持类球体的活性。将培养瓶转移至运输包装中。

使用 P1000 移液器机械性破坏细胞外基质（ECM），并将其转移至无菌的 1.5 毫米离心管中。在 4 摄氏度下以 1,000 ×g 离心该管。随后，彻底去除上清液，并将离心管置于冰上。向沉淀中加入新 ECM 溶液体积的 2 至 4 倍，通过上下吹打 10 次混匀管内内容物，注意避免引入气泡。

取5至20微升SBNET混合液中的ECM，转移至新的96孔板中，使ECM凝固。随后，用新鲜的SBNET培养基覆盖已凝固的ECM，并将板放入培养箱中。若需将SBNET类球体运送至其他实验室，请将类球体连同新的ECM一起转移至T25培养瓶中，使其ECM凝固。加入SBNET类球体培养基至瓶中，拧紧瓶盖，并准备运输包装。