外泌体阻断剂制备：一种保存培养的人结肠癌细胞外泌体的实验方案

外泌体是由培养细胞分泌到上清液中的细胞外囊泡结构。制备外泌体样本时，首先将含有外泌体的培养上清液收集于离心管中。高速离心使完整的外泌体沉淀成团，弃去上清液。

用固定缓冲液中的戊二醛处理外泌体沉淀。将混合物在冰上孵育所需时间，以保持外泌体的形态。戊二醛可渗入外泌体并交联蛋白质。固定缓冲液可维持外泌体处于中性pH环境，以利于后续固定过程。

弃去含戊二醛的缓冲液，加入四氧化锇溶液——一种可穿透膜双层并固定外泌体中脂质的次级固定剂。移除四氧化锇溶液后，用浓度递增的丙酮溶液对外泌体进行系列处理，此过程可使外泌体脱水。

用包埋介质-丙酮混合液替换纯丙酮。逐渐增加该混合液中包埋介质的比例。

将含有外泌体的包埋混合液倒入所需的模具中。在高温下用烘箱干燥模具。这将导致包埋介质在外泌体周围发生聚合，形成包埋块。

为固定纯化的外泌体沉淀，加入1毫升含2.5%戊二醛的0.1 M 二甲胂酸钠溶液（pH 7.0）。将脂质双层囊泡在4摄氏度下孵育1小时。随后，去除固定液，并用1毫升0.1 M 二甲胂酸钠缓冲液在室温下洗涤沉淀10分钟。

然后，在4摄氏度条件下，用1毫升2%的四氧化锇对样品后固定1小时。去除固定液后，用0.1 M的二甲胂酸钠缓冲液洗涤外泌体沉淀物三次，每次更换缓冲液，间隔10分钟。随后，将样品依次置于浓度梯度递增的丙酮溶液中，每步振荡10分钟，进行脱水处理。

接下来，配制一份由三份丙酮和一份低黏度包埋混合液组成的溶液。用该混合液替换丙酮，并将样品孵育30分钟。随后逐步增加低黏度包埋介质的比例，每步均孵育30分钟。

最后，将外泌体沉淀在100%低黏度包埋剂中于室温下孵育过夜。次日，使用包埋模具将样品包埋于纯低黏度包埋剂中，并在65摄氏度下烘烤24小时。