嵌入外泌体的切片、染色和 TEM 成像:使用 TEM 可视化外泌体结构特征的方案

外泌体是纳米大小的球形囊泡，由脂质双层包围，其中含有存在于管腔内的 DNA、RNA 和蛋白质分子。

要使用透射电子显微镜 （TEM） 可视化外泌体结构，首先取一个外泌体块 - 包含嵌入外泌体的固体基质块。使用超切片机，获得外泌体块的超薄切片。

外泌体切片收集在合适的网格上，并使其粘附在表面上。网格为外泌体标本提供稳定的支撑，以进行后续染色步骤。

接下来，将网格放在一滴醋酸铀酰（一种重金属染色剂）上，并孵育所需的时间。铀酰离子与外泌体中存在的脂质、蛋白质、DNA 和 RNA 相互作用。

随后，用柠檬酸铅染色外泌体切片，柠檬酸铅也与外泌体生物分子结合。柠檬酸铅与预结合的铀酰离子结合较弱，并在成像过程中增强与背景的对比度。

使用TEM观察双染色的外泌体。TEM 将电子束聚焦在外泌体样品上。与未染色区域相比，外泌体中的染色区域对电子的散射力更强。

物镜孔径过滤这些高度散射的电子。因此，含有染色生物分子的外泌体看起来比背景更暗。

使用超切片机，制备厚度为 60 纳米的切片。将切片放在镍网格上，用2%醋酸铀酰对其中一些进行双重染色20分钟，然后用柠檬酸铅染色10分钟。接下来，将染色切片放入透射电子显微镜中，使用 80 kV 观察样品，并按照曝光时间的自动设置进行。在查看外泌体图像的情况下，使用显微镜的软件获取并保存图像。