肌肉组织切片的速冻方法:一种获取快速冷冻小鼠肌肉组织超薄切片的实验方案

0 次观看3:30 分钟 • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

速冻是一种将组织样本迅速冷冻至超低温的技术,有助于保持组织内DNA、RNA和蛋白质的天然结构。

为了快速冷冻肢体肌肉,首先从一只小鼠的后肢获取新鲜提取的肌肉组织。

接下来,将液氮放入泡沫箱中,并将装有异戊烷(一种高导热性液体)的烧杯浸入液氮中。

将异戊烷冷冻至溶液变得黏稠。同时,在软木塞片上滴加一滴液态冷冻介质。

握住后肢肌肉组织的肌腱,将组织块垂直嵌入液态冷冻介质中。这种方向有助于后续测定肌肉的横截面积。

将带有肌肉组织的软木片短暂浸入预冷的异戊烷浴中。这有助于肌肉组织快速且均匀地冷冻。

冷冻介质在低温下凝固,在肌肉组织周围形成一层胶状层,从而将其固定在原位。将肌肉组织块置于冷冻切片机中,以获得薄切片。

将切片置于玻璃载玻片上,并在较低温度下保存,以备进一步进行组织学分析。

当所有肌肉组织收集完毕后,将装有异戊烷的塑料50毫升烧杯下半部分浸入液氮中。当异戊烷变得略微粘稠,且烧杯内壁出现可见的白色固态层时,向样品夹上滴加几滴包埋介质。

然后,用镊子夹住肌腱提起肌肉,小心地将新鲜肌肉的一端垂直放置在包埋介质上方,使其相对于软木塞保持垂直。接着,在保持肌肉垂直的同时,将持样品头及其附着的肌肉浸入异戊烷浴中 7 到 15 秒,直至组织完全冻结。充分冻结的标本将呈现乳白色。随后,将肌肉放入标本管中,立即在负 80 摄氏度条件下储存。

为了保存样本中的RNA以及酶的结构和活性,肌肉组织在提取后应尽快冷冻。

为了切取冷冻肌肉组织,首先将冷冻切片机内腔的工作温度设置为负23摄氏度。让存放于负80摄氏度的样本在该工作温度下平衡数小时。随后,在肌肉的中腹部区域垂直于包埋轴向切取多个厚度为8 µm的切片,并在切片过程中将其收集到室温的玻璃载片上。所有切片收集完毕前,样本应始终保持在冷冻切片机腔体内。切片完成后,将样本储存于负80摄氏度,待后续分析使用。

07:28

石蜡包埋和冷冻切片的Drosophila成体肌肉

相关视频

0 观看次数

05:58

组织分拣与冷冻:骨骼肌疾病模型的制备

相关视频

0 观看次数

10:27

用于组织学分析的肌肉冷冻切片制备中的注意事项

相关视频

0 观看次数

02:37

冷冻小鼠脑组织切片:从小鼠冷冻脑组织获取薄切片的操作流程

相关视频

0 观看次数

07:39

通过注射心脏毒素诱导急性骨骼肌再生

相关视频

0 观看次数

08:17

单只小鼠骨骼肌连续区域的冷冻切片用于基因表达与组织学分析

相关视频

0 观看次数

05:57

一种利用肌球蛋白重链免疫组织化学对大鼠肌肉横截面肌纤维群体分析的快速自动化方案

相关视频

0 观看次数

06:42

一种多孔冻存管可消除肌肉组织直接浸入液氮时产生的冷冻伪影

相关视频

0 观看次数

10:11

一种可从新鲜冷冻小鼠骨组织中获得高质量RNA的激光捕获显微切割方案

相关视频

0 观看次数

07:17

大鼠声带神经肌肉分析前的制备

相关视频

0 观看次数

最后更新:22 八月 2026