0 次观看 • 5:13 分钟 • April 30th, 2023
在人体中，胃底是胃的最上部。胃底上皮由大量胃腺组成，可分泌有助于消化的胃液。
为了分离胃底腺，首先将人胃底组织放入烧杯中。向烧杯中加入适当的缓冲液，充分清洗胃底组织。清洗可去除胃底组织中的污染碎片和血液。
将清洁的组织转移至培养皿中。使用无菌纱布擦去保护性黏液层，从而暴露其下的上皮层。用镊子用力刮取组织最表层的上皮层。
将刮取的上皮组织转移至另一培养皿中，并将其切碎成更小的片段。将切碎的组织加入含有添加了胶原酶的缓冲液的烧瓶中。在所需温度下孵育，并持续振荡以防止结块。
胶原酶消化上皮层中存在的细胞外基质蛋白，使解离的胃底腺释放到悬浮液中。将悬浮液过滤至新的离心管中，以去除未解离的团块。
将腺体滤液静置于冰上，以沉淀腺体。弃去含有细胞碎片的上清液，用新鲜缓冲液重悬腺体沉淀。离心后保存腺体沉淀，待后续使用。
首先，将准备好的组织收集到一个装有无钙/镁 DPBS 的大型塑料容器中。将塑料容器置于冰上直至使用。接下来，用镊子在含有 100 毫升无钙/镁 DPBS 的无菌烧杯中剧烈冲洗组织约 30 秒。然后，使用无菌纱布擦去上皮层的黏液层。
接下来，使用大号镊子牢固地夹住组织的肌层。然后，使用大号弯头止血钳用力刮取上皮组织。将刮取的上皮组织置于无菌的聚苯乙烯培养皿中。为了优化组织消化效果，将上皮组织剪切成小碎片。随后，用添加了抗生素的无钙/镁DPBS缓冲液洗涤组织。
多次清洗以去除血液，将洗涤液弃入废液杯中。然后，将洗涤后的上皮组织碎片收集至一个含有25毫升搅拌子和预热培养液的125毫升玻璃圆底烧瓶中。收集完组织碎片后，用橡胶隔垫密封圆底烧瓶，插入一根20G脊髓穿刺针，并通过橡胶管将隔垫连接至氧气瓶。
插入10至15根流出针至隔膜中，以防止其破裂，然后使用夹具将装置固定在铁架台上。接着，打开氧气出口并调至低流量。随后，在搅拌器上将水浴锅校准至37摄氏度，持续30至45分钟。校准完成后，将装置放入水浴锅中。孵育15分钟后，检查是否有解离的腺体。
在完成所需的孵育时间后，使用血清移液管向孵育液中加入50毫升预热的DMEM/F-12培养基。接着，将获得的腺体混合物通过无菌纱布过滤至四个50毫升的锥形管中。然后将滤液置于冰上孵育15分钟，以使腺体沉降至锥形管底部。使用血清移液管从腺体悬液上层弃去40毫升上清液。
将剩余的10毫升腺体混合物重悬于10毫升添加了抗生素的DPBS中。然后，将全部混合物分装至5毫升细胞培养试管中。在4摄氏度下，以65 × g 离心5分钟。离心后，小心移除上清液。