小鼠舌上皮细胞的分离与培养：一种从小鼠模型中分离和培养舌上皮细胞的操作方法

舌由复层鳞状上皮和其下方一层致密的结缔组织（称为固有层）构成。上皮由多层鳞状上皮细胞组成，可提供抵抗机械应力的保护作用。

为了分离上皮细胞，首先取新鲜的小鼠舌头组织。将舌头组织切碎，以获得较小的组织碎片。接着，用含有胶原酶、透明质酸酶和脱氧核糖核酸酶的定制消化液处理这些组织碎片。

胶原酶和透明质酸酶可降解将组织结合在一起的细胞外基质，促进单个细胞释放到悬液中。脱氧核糖核酸酶则降解来自裂解细胞的任何游离DNA。

加入含血清的缓冲液以灭活蛋白水解酶。随后，通过细胞筛过滤样品，去除未消化的组织碎片和残渣，从而获得上皮细胞的单细胞悬液。

离心以分离细胞。弃去含有消化液的上清液。用新鲜培养基重悬细胞沉淀。最后，将适量的细胞悬液转移至无菌培养皿中。培养细胞。

上皮细胞附着于培养皿的底面。根据单个上皮细胞的增殖能力，它们开始形成集落。

使用手术剪从6周龄的雄性或雌性B6转基因小鼠中取出舌组织。用解剖刀将组织切碎成极小的片段，并将碎片收集到含有4.5毫升无血清RPMI基础培养基的15毫升离心管中。向管中加入200微升三酶混合液，将样品在37°C下孵育30分钟，每隔10分钟轻弹离心管以促进组织的酶解离。孵育结束后，加入含5% FBS的PBS终止反应，并将细胞悬液通过70微米孔径的细胞滤网过滤，以分离细胞与较大的组织碎片。

通过离心收集细胞，并将沉淀重悬于3毫升完全培养基中。然后，将细胞以每60毫米培养皿3毫升完全培养基的量进行接种。将滤膜表面保留的细胞团块转移至另一个60毫米培养皿中，并加入3毫升完全培养基。将两个培养皿均置于培养箱中，直至形成明显的细胞克隆。