RNA原位杂交中的探针杂交与信号放大：组织切片中特异性RNA序列检测技术

为了在细胞中检测特定的RNA序列，首先将组织切片置于载玻片上。在组织切片上覆盖含有目标RNA探针的适当杂交缓冲液。

这些探针是Z形的RNA分子，一端具有靶标识别区域，另一端具有尾部序列，两个末端由一个间隔臂连接。

现在，将玻片置于杂交炉中，在最适温度下孵育。Z形RNA探针进入细胞，并成对地与相应的靶mRNA序列杂交。

从烘箱中取出玻片，将玻片浸入洗涤液中，以去除未结合的探针和多余的杂交缓冲液。

随后，加入预扩增溶液并进行孵育。预扩增分子会结合至两个相邻Z探针的尾部序列。该分子不会与单个Z探针结合，从而确保特异性。

接下来，加入扩增试剂混合物并进行孵育。多个扩增分子会杂交到单个预扩增序列上。

最后，使用所需的标记探针对组织切片进行标记，以检测细胞中特定 RNA 序列的存在。

开始杂交时，轻敲并弹动载玻片以去除多余的液体，然后将其放回载玻片架中。从烘箱中取出预热的HPV探针，每张切片加入约四滴，确保完全覆盖组织。用盖子盖好托盘，放入40摄氏度烘箱中孵育2小时。孵育完成后，将托盘从烘箱中取出，并取出载玻片架。

每次取一张玻片，迅速去除多余的液体，将玻片放入盛有1×洗涤缓冲液的染色缸中的玻片架内，在室温下持续振荡洗涤2分钟，并用新鲜的1×洗涤缓冲液重复洗涤一次。轻敲并快速甩动以去除玻片上多余的液体，再次将玻片放入玻片架中。每个组织切片上加入约四滴室温的AMP1，确保完全覆盖每个切片。用盖子盖好托盘，放入40摄氏度的烘箱中孵育30分钟。

从烤箱中取出托盘后，移除载玻片架。每次处理一张载玻片，迅速去除多余的液体，并将载玻片放入盛有1×洗涤缓冲液的染色缸中，浸没于其中，在室温下持续振荡洗涤2分钟，并用新鲜的1×洗涤缓冲液重复此步骤。