鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）肿瘤模型：一种模拟肿瘤细胞神经周围浸润的鸡胚内实验方法

在某些转移性癌症中，肿瘤细胞会从原发部位向外延伸并侵入神经组织，这种现象称为神经周围侵犯或 PNI。

可以在卵内卵黄囊膜或绒毛尿囊膜（CAM）表面演示PNI，该膜模拟了人类上皮组织的基底膜。

首先，取一枚有活力且已受精的鸡胚蛋，将其蛋壳部分打开，暴露出完全发育的尿囊绒毛膜（CAM）。

接下来，从小鼠的脊髓中分离背根神经节（DRG）。DRG 是一群感觉神经元，癌细胞可利用这些神经元侵入神经周围间隙。

将背根神经节（DRG）置于合适的培养基中，加入荧光染料进行孵育，以标记组织便于观察。随后，将背根神经节转移至鸡胚尿囊膜（CAM）表面，注意避免破坏膜结构。

用透明薄膜覆盖鸡蛋，以防止微生物污染。随后孵育鸡蛋，以促进背根神经节（DRG）与绒毛尿囊膜（CAM）的整合。

孵育后，将荧光标记的癌细胞接种于 CAM 的干燥表面，远离 DRG。干燥表面可减少癌细胞的扩散，从而实现规则的肿瘤形成。

封闭蛋壳开口并继续孵育，以促进背根神经节与癌细胞之间的相互作用。在显微镜下可观察到癌细胞向移植的背根神经节生长，从而证明存在神经周围浸润。

将背根神经节移植到绒毛尿囊膜时，使用精细的无菌镊子在培养皿中轻轻夹取一个神经节，并在盛有新鲜HBSS的容器中轻轻冲洗组织。将神经节放置于一枚鸡蛋的绒毛尿囊膜上，注意避免刺破膜，然后用无菌透明薄膜敷料覆盖鸡蛋的所有开口。完成所有鸡蛋的移植后，将其放回加湿的孵蛋培养箱中，静置培养2天，期间不旋转鸡蛋。

孵育结束时，将鸡胚转移至超净工作台，使用剪刀和镊子打开透明薄膜敷料。随后，在每个鸡胚的绒毛尿囊膜上距离每个背根神经节约2毫米处，加入5微升含有50万至100万个荧光标记肿瘤细胞的HBSS溶液，保持神经节与细胞之间的距离均匀一致。然后，用新的薄膜敷料覆盖鸡胚，并将鸡胚放回孵蛋箱中，静置培养7天，期间不进行旋转。