使用miRNA抑制剂模拟肿瘤内治疗：一种在小鼠模型中分析miRNA抑制剂对肿瘤生长影响的方法

miRNA抑制剂是小的、经过化学修饰的单链RNA分子，能够与内源性miRNA结合并抑制其活性。

为了模拟使用miRNA抑制剂进行瘤内治疗的效果，首先取含有生物发光酶标记的癌细胞悬液。向癌细胞悬液中加入液化的基底膜基质。

将所得混合物装入注射器中，皮下注射至免疫缺陷裸鼠的左侧 flank 部位。让癌细胞生长并形成肿瘤。

同时，通过将脂质纳米颗粒（一种体内递送载体）加入含有miRNA抑制剂溶液的试管中，制备处理混合物。孵育该处理混合物，以使miRNA抑制剂被包裹进脂质纳米颗粒中。

将治疗混合物直接注射到肿瘤中。脂质纳米颗粒将miRNA抑制剂递送至肿瘤细胞内。进入细胞后，miRNA抑制剂与特定的致癌性miRNA结合，阻止其与靶标mRNA杂交。这会导致癌细胞死亡。

最后，将生物发光底物溶液皮下注射到小鼠体内。在生物发光酶存在的情况下，癌细胞内的底物发生氧化反应，随后发射出光信号。

使用生物发光成像舱观察小鼠。瘤内注射的miRNA抑制剂可显著抑制小鼠体内肿瘤生长。

在完全培养基中建立 Cal62 人甲状腺癌细胞系后，将 1 × 10⁶ 个细胞的等分试样悬浮于 4°C 的 50 µL PBS 中，并与等体积的基底膜基质混合。

将细胞加入配备27G 1/2"针头的1毫升注射器中，并将100微升样品皮下注射至6周龄免疫缺陷型BALB/c裸鼠的左侧 flank。注射后两周，将antagomiR或对照处理缓冲液加入1.5毫升离心管中含160微升室温体内递送试剂的溶液中，立即涡旋振荡10秒，以确保混合物充分形成复合物。

将处理液在50摄氏度下孵育30分钟，随后在微量离心机中短暂离心。然后用新鲜的PBS将沉淀的处理复合物稀释六倍，并充分混匀，将全部200微升处理液体直接注射入肿瘤中。

每周两次，向每只实验动物皮下注射 50 微升浓度为 40 毫克/毫升的 D-荧光素底物溶液，注射前需确保动物在异氟烷麻醉下对脚趾夹捏无反应。随后将动物放入活体生物发光成像系统的成像室中，按照标准操作流程，使用活体成像软件采集生物发光信号。