0 次观看 • 2:59 分钟 • April 30th, 2023
类球体是模拟体内肿瘤微环境的三维体外球形细胞聚集体，有助于研究肿瘤进展。为通过包埋法保存这些类球体，首先取一支无菌管，其中含有置于所需缓冲液中的类球体。
用多聚甲醛处理类球体。多聚甲醛可交联细胞蛋白，从而稳定并保存细胞结构。离心类球体并移除含多聚甲醛的上清液。将类球体沉淀重悬于缓冲液中。
接下来，配制所需浓度的熔融琼脂糖凝胶溶液。在显微镜载玻片上滴加一滴琼脂糖凝胶。将载玻片置于加热块上，以防止琼脂糖凝固。
使用带有宽孔吸头的微量移液器从离心管中收集类球体。小心地将类球体移入琼脂糖凝胶液滴的中心，避免触碰载玻片。随后，将载玻片置于适宜温度下孵育，使细胞外基质（ECM）凝固，从而将类球体固定在其中。
轻柔地将显微镜载玻片上的半固体液滴转移至组织包埋盒中。将包埋的类球体保存在乙醇中，直至进行后续下游分析。
首先，在第一天按照文本方案在通风橱中对类球体进行固定。在第二天，将琼脂糖凝胶放入盛有水的烧杯中，并置于微波炉内加热，随后将其置于设定为 60 摄氏度的台式加热板上保温，直至后续使用。
在通风橱中用1毫升预冷的1×PBS清洗类球体两次，每次清洗后吸除大部分PBS。准备一支20微升移液枪头，将其尖端以倾斜角度剪开，以获得一个更尖锐且孔径更大的枪头。
此后，在载玻片上制备一滴琼脂糖凝胶。将载玻片置于温热的加热块上，以防止琼脂糖凝固。使用经过改造的移液器吸头，尽可能多地捕获体积为15至20微升的类球体。
小心地将球状体注射到琼脂糖凝胶液滴的中心，注意不要触碰载玻片。在室温或4摄氏度下孵育5至10分钟，使琼脂糖凝胶液滴硬化。当凝胶液滴已部分凝固但仍较软时，使用手术刀小心地将其从载玻片推入塑料组织包埋盒中。将组织包埋盒转移至盛有乙醇的烧杯中，并在室温下保存。