从小鼠模型制备细胞外基质：一种制备去细胞化小鼠舌细胞外基质的有效方法

细胞外基质（ECM）是组织微环境中非细胞成分，由细胞分泌的结构蛋白、调控蛋白和多糖构成的复杂网络。ECM 为细胞提供结构和生化支持，并调控细胞的生长。

为了制备舌部细胞外基质，首先取新鲜收获的小鼠舌头。用乙醇清洗以去除其脂质层。

接下来，对其进行反复的冻融循环。冷冻可促进 细胞内冰晶的形成，而解冻则使冰晶融化，从而导致细胞膜破裂。

现在，将舌头悬浮于抗生素溶液中，以抑制细菌生长。随后，用高渗盐水溶液处理该器官。在高溶质浓度条件下，水从细胞中流出，导致细胞皱缩。此步骤有助于细胞死亡及其与细胞外基质的脱离。

将舌组织置于非离子型表面活性剂中孵育。该表面活性剂可完全溶解细胞膜和核膜，促进细胞内含物释放到溶液中。

最后，将舌组织置于含有钙离子和镁离子的溶液中悬浮，随后进行核酸酶处理。钙离子和镁离子可增强核酸酶的活性，以降解溶液中任何游离的核酸。

将脱细胞的舌组织保存在适当的缓冲液中，直至进行后续处理。

根据文本方案，将安乐死小鼠的舌头分离后，将组织浸入75%乙醇中3分钟。然后，将每份舌头转移至含有1毫升10毫摩尔无菌PBS的1.5毫升微量离心管中。为进行细胞裂解，将舌头在-80摄氏度下冷冻1小时，随后在室温下解冻45分钟。重复冻融过程再两次。

接下来，在一个含有75%乙醇的3.5厘米或6厘米培养皿中，使用外科针将每条舌组织穿到一段外科缝线上，并用一小块无菌锡箔包裹缝线末端。在另一个3.5厘米或6厘米培养皿中，用3毫升PBS冲洗每条舌组织30秒。然后，在一个广口瓶中，将90微克/毫升的氨苄青霉素溶于250毫升无菌超纯水中，并加入搅拌子。

将最多5个舌体放入瓶中，使其距离瓶底约2厘米，并拧紧瓶盖，使部分缝合线留在瓶外。将瓶子置于磁力搅拌器上搅拌12小时。随后，在孵育结束后，配制250毫升含90微克/毫升氨苄青霉素的无菌1摩尔氯化钠溶液。将舌体和搅拌子转移至瓶中，拧紧瓶盖。将瓶子再次置于磁力搅拌器上搅拌24小时。

为进行细胞裂解，将90微克/毫升的氨苄青霉素加入250毫升无菌PBS中的2% Triton X-100溶液中。将组织和搅拌子转移至瓶中并拧紧瓶盖。随后，搅拌该瓶48小时。在配制含氨苄青霉素的氯化钙和氯化镁溶液后，将组织和搅拌子转移至该瓶中，并继续搅拌24小时。

为每个舌组织样本，在一个微量离心管中配制1毫升含300微摩尔DNase的HBSS溶液。将舌组织转移至这些管中，并确保缝线的同一部分留在管外。然后在37摄氏度下孵育组织24小时。孵育后，将样本重新转移至含氨苄青霉素的无菌PBS广口瓶中，并置于搅拌器上继续处理24小时。孵育结束后，将制备好的舌组织细胞外基质（TEM）保存在4摄氏度的无菌PBS中，直至后续使用。