细胞外基质悬液制备：一种从组织来源的细胞外基质获得均一悬液的技术

细胞外基质（ECM）是组织中一种复杂的支撑网络，由蛋白聚糖和蛋白质组成。

为了获得均质化的细胞外基质（ECM），首先取定量的去细胞化ECM粉末放入离心管中。然后向管中加入酸化缓冲液，形成ECM悬浮液。

同时，在另一支试管中，将α-淀粉酶（一种糖酵解酶）溶解于相同的酸化缓冲液中。该缓冲液的酸性pH有助于α-淀粉酶发挥最佳活性。

接下来，向含有细胞外基质悬液的试管中加入α-淀粉酶溶液。在持续振荡条件下孵育该试管。α-淀粉酶可水解蛋白聚糖中存在的糖类——即碳水化合物部分。

离心以沉淀富含蛋白质的细胞外基质（ECM）组分，使消化后的糖类及用过的酶保留在上清液中。弃去上清液。

将沉淀重悬于氯化钠溶液中。氯离子可将蛋白质从细胞外基质（ECM）沉淀中提取至悬浮液中。离心后弃去含有氯化钠的上清液。

接下来，向含有蛋白质的细胞外基质沉淀中加入乙酸。乙酸可进一步溶解细胞外基质蛋白聚集体，使其形成悬浮液。

使用匀浆器获得均匀的细胞外基质（ECM）悬液。将均匀的ECM悬液于4 °C保存，用于后续分析。

称取250毫克粉碎或冷冻研磨的细胞外基质（ECM），转移至15毫升离心管中。向离心管中加入5毫升0.22摩尔的NaH₂PO₄缓冲液，并在管壁上标记液面位置。然后，将7.5毫克α-淀粉酶加入1毫升0.22摩尔的NaH₂PO₄缓冲液中，配制α-淀粉酶储备液。

接下来，向样品中加入100 µL的α-淀粉酶储备溶液。然后加入0.22 mol/L的NaH₂PO₄，使最终体积达到10 mL。在300 rpm和室温条件下连续振荡悬浮液72小时。

将悬液在1,500 × g 条件下离心10分钟。小心收集并弃去上清液，避免扰动已消化的细胞外基质沉淀。然后，加入10毫升用双蒸水稀释的5% NaCl溶液重悬沉淀物，并在300 rpm条件下持续振荡10分钟。

使用10毫升双蒸水重悬沉淀前，再重复洗涤两次。然后，在室温下以300 rpm持续振荡悬浮液10分钟。再次离心样品后，小心收集并弃去上清液，避免扰动已消化的细胞外基质沉淀。

加入0.2摩尔的乙酸至5毫升刻度线，涡旋混匀。然后，在37摄氏度下以120转/分钟持续振荡悬浮液过夜。次日，使用配备10毫米宽锯齿探头的手持式匀浆器，在室温下以10秒为间隔对细胞外基质（ECM）悬浮液进行匀浆处理，直至无可见碎片残留为止。