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微载体是微米级的球形支撑基质,具有相互连通的孔隙,可为细胞附着和生长提供广阔的表面积。
制备细胞外基质(ECM)来源的微载体时,首先将精细粉末状的ECM制成均匀悬浮液。将该悬浮液装入连接输液装置的注射器中。将注射器固定在注射泵上。将针头垂直置于低温容器上方适当距离处。
现在,将针头连接到高压电源的正极。将一条折叠的铝箔带贴在烧瓶边缘,并将其连接到接地端以完成电路。
接着,将液氮注入烧瓶,使铝箔的内端浸没于其中。施加所需的电压,并将注射泵设定至合适的流速,以启动电喷雾。当导电的细胞外基质悬浮液从针尖流出时,在电场和表面张力的作用下,其形状发生变形,形成一个尖锐的液锥。
随着电压的增加,悬浮液喷射而出,最终分裂成带电的微小液滴,并落入液氮浴中。液氮会瞬间冻结这些微滴,使其中的溶剂颗粒结晶化。
将冷冻的微滴转移至新的离心管中。对样品进行冻干。此步骤有助于去除样品中冻结的溶剂颗粒,从而在其位置形成孔隙。将多孔微载体的干燥粉末储存,以用于后续应用。
将冷冻研磨的细胞外基质(ECM)悬液在100 rpm条件下持续振荡孵育过夜。取3毫升ECM悬液加入3毫升鲁尔锁型注射器中,并将带翼输液装置连接至注射器接口。将注射器固定于注射泵中,随后将针头固定在铁架台上,使针尖垂直朝下,距离低型杜瓦瓶顶部4至6厘米处。
接下来,将一个鳄鱼夹电极连接到针尖上,并确保该鳄鱼夹连接至高压电源的正极端。将铝箔条折叠在真空烧瓶的边缘上。然后,将第二个鳄鱼夹电极连接到铝箔的外缘,并将其连接至电源的接地端。
在杜瓦瓶中加入液氮,液面距瓶口约1厘米,使铝箔的四分之三浸没于液氮中。然后,将注射泵设置为30毫升/小时的输注速率,并按照文本方案对样品进行电喷雾处理。输注完成后,小心倾倒出杜瓦瓶中多余的液氮,使微载体悬浮在约25毫升的液氮中,以确保其保持冻结状态。
立即将载有微载体的液氮通过一次性倾倒动作转移至50毫升离心管中。然后使用刮勺收集液氮罐中残留的冷冻微载体,并将其加入离心管中。为准备冻干,用带有小孔的铝箔覆盖离心管。将盖好铝箔的离心管放入冻干机瓶中。随后立即连接冻干瓶至冻干机,过夜干燥样品。