0 次观看 • 4:55 分钟 • April 30th, 2023
神经周围侵袭（PNI）是指癌细胞沿神经迁移并侵入神经周围膜——这一微环境适宜癌细胞生长和转移。
为在体外模拟 PNI，首先在培养皿上加入一滴细胞外基质（ECM）悬液，使其形成半球形。随后，将培养皿孵育以增强三维支架的结构和功能特性。
接下来，将预先收获的背根神经节（DRG）——即一群感觉神经元——小心地置于半固体细胞外基质（ECM）液滴的中央。孵育以使DRG嵌入ECM液滴中。
随后，加入适量的生长培养基并进行培养。添加了营养成分的细胞外基质可促进背根神经节向外长出称为神经突的小型神经突起，这些神经突以放射状向液滴边缘延伸。
移除用过的培养基，以准备用于后续检测的细胞外基质（ECM）液滴。将经荧光染色的贴壁癌细胞接种到液滴表面。由于液滴呈半球形，癌细胞会滚动并沿液滴边缘沉降。
孵育培养皿，以促进癌细胞与神经突的相互作用。在荧光显微镜下观察，可见癌细胞沿神经突走行并朝向背根神经节（DRG）迁移，证实存在神经周围侵袭。
为制备半固体基质液滴，将一个玻璃底培养板从冰上转移至操作显微镜下的冰块上。将容量不超过10微升的移液器枪头以45度角直接接触玻璃表面，小心地在玻璃上 dispensing 1.5微升基质液滴。当基质与培养板接触后，缓慢将移液器枪头移离玻璃表面。
在培养皿的四个角上各滴加一滴基质，然后将培养皿转移至室温表面放置约1分钟。当基质略微变硬后，将培养皿放回冰块上，用闭合的显微镊子左手轻轻舀取背根神经节（DRG）。
用右手小心地将神经组织转移到21G针头的尖端，并用针头轻轻将背根神经节（DRG）插入基质液滴的中央。背根神经节（DRG）应易于从针头释放并进入基质中央位置。
将DRG组织块插入每个四滴液滴后，将培养板放入37摄氏度培养箱中孵育3分钟。当所有DRG均包埋完毕后，依次将培养板倾斜一定角度，缓慢加入4毫升添加了10% FBS的DMEM，使培养基逐渐与基质-DRG单元接触。
将培养板放回培养箱继续孵育 48 至 72 小时。当神经突延伸至基质边缘距离的至少 75% 时，吸除孔中的培养基，但不要移除基质-背根神经节（DRG）单元。然后，使用带有平滑按压手柄的 200 微升移液器，在每孔基质 DRG 检测体系上加入两滴细胞浓度为每毫升培养基 3 × 10⁵ 个细胞的悬液，并将培养板放回培养箱。一小时后，沿玻璃底板的侧壁轻轻加入 4 毫升含 10% 胎牛血清（FBS）的 DMEM 培养基，随后将培养板放回培养箱，直至下一次显微镜观察。