脱细胞猪食管支架制备：一种由猪食管生成无细胞支架的技术

来源于特定组织细胞外基质的脱细胞支架可模拟其天然的细胞外微环境。这些支架保留了原有的结构完整性和生化组成，是组织工程中极具前景的平台。

为制备脱细胞猪食管支架，首先取新鲜切除的猪食管。沿纵向将食管平分为两半，并用适当的缓冲液冲洗以去除任何残留物。接着，将食管固定，使其黏膜面（最内层）朝上。

在食管一端将黏膜与下方的黏膜下层分离。沿黏膜的疏松结缔组织（即固有层）纵向解剖食管，以完全分离黏膜表面与下方的黏膜下层。

随后，切除黏膜的近端和远端区域，这些区域含有更高密度的黏膜下腺体以及更厚的固有层。将黏膜组织切成大小均匀的片状。

用添加了抗生素的高渗盐水溶液处理组织。抗生素有助于防止细菌生长。在高溶质浓度下，水从细胞中移出，导致细胞收缩。此步骤可进一步促进细胞死亡及其与细胞外基质的脱离。

现在，轻轻将已松动的上皮组织从下方组织上剥离。用缓冲液冲洗组织以去除细胞碎片。最后，将组织置于甘油中孵育，甘油可通过脱水和裂解细胞进一步促进组织去细胞化，同时保持基底膜的完整性。

制备脱细胞猪食管支架时，首先使用剪刀和镊子将猪食管纵向切开。接着，将食管放入含有100毫升无菌PBS的180毫升无菌容器中，轻轻振荡洗涤10分钟，以去除任何残留物。

在清洗组织的同时，用70%乙醇喷洒软木解剖板。待软木板干燥后，将食管黏膜面朝上用图钉固定在板上。然后，用无菌镊子夹住食管一端的黏膜表面，将组织从板上轻轻拉起，以分离黏膜与下方的黏膜下层。

然后，使用无菌手术刀片沿黏膜下层纵向解剖食管，在解剖过程中逐步移除固定针，以便将黏膜剥离。弃去下方的黏膜下层，用手术刀将剩余的黏膜切成5厘米见方的小块。如刚才所示，将组织块置于150毫升无菌PBS中，轻轻振荡洗涤。

五分钟后，将组织转移至含有150毫升、37摄氏度、添加抗生素的1摩尔氯化钠溶液的180毫升容器中。72小时后，将组织转移至150毫升无菌磷酸盐缓冲液（PBS）中，此时上皮层将开始明显与下方组织分离。

使用无菌镊子和手术刀片去除脱落的上皮组织，并将剩余组织放入新鲜的150毫升无菌PBS中，轻轻振荡，每次5分钟，共洗涤三次。此后，组织必须在甘油中保存至少四个月，以彻底灭菌支架。