患者来源的肿瘤异种移植:一种用于评估尿路上皮细胞癌的实验性小鼠模型构建技术

0 次观看3:32 分钟 • April 30th, 2023

为了建立患者来源的尿路上皮细胞癌(UCC)小鼠模型,可将人源UCC细胞接种至免疫缺陷小鼠体内,以研究癌症的发生发展及转移过程。

开始异种移植时,取一只免疫缺陷的雌性小鼠并进行麻醉。剃除小鼠下背部的毛发以暴露其骨盆区域。随后,将小鼠置于仰卧位,使其暴露的皮肤与分散电极垫接触,该电极垫作为接地电极,用于在电刺激过程中完成电路。

接下来,取一根连接着导丝的套管针(一种细的中空管)。润滑套管针表面后,将其插入小鼠的尿道以进入膀胱。将一个活性电极置于导丝上,以刺激膀胱壁。该操作有助于破坏膀胱黏膜的保护屏障——黏多糖层,从而促进后续肿瘤细胞的植入。

现在,轻柔地将套管针-导丝组件从尿道中取出。取另一支连接含有UCC细胞悬液注射器的套管针,插入小鼠尿道。将UCC细胞注入小鼠膀胱内。癌细胞会与膀胱黏膜相互作用,形成肿瘤,并可能最终扩散至其他组织和器官。

为准备小鼠进行UCC细胞注射,使用脱毛膏去除一只6至8周龄雌性NOD/SCID小鼠的下背部毛发。为将UCC细胞注入膀胱,首先将单极电灼仪的功率设置为4瓦。麻醉小鼠后,将其置于仰卧位,鼻部放入异氟烷鼻罩中,裸露的背部牢固地贴合在分散电极上。

用润滑胶将24号套管针润滑,然后轻柔但稳固地经小鼠尿道插入套管针。如果套管针插入时发生弯曲,可先将导丝插入套管针内一半长度以提供支撑。随后,将0.64毫米固定芯直导丝完全插入,使其末端超过套管针尖端1毫米。

将单极针与导丝接触1秒,以实现对膀胱黏膜的电刺激。将一根新的无菌血管套管连接至1毫升鲁尔锁式注射器,并抽取最多200微升的UCC细胞。从尿道中取出导丝和血管套管,然后插入已连接含有细胞注射器的血管套管。

向小鼠膀胱内注射 50 微升细胞,并等待数秒,以使细胞黏附于膀胱壁,然后拔出套管针。最后,将小鼠从异氟烷鼻罩和接地垫上移开,并在术后观察 1 小时,注意是否有痛苦迹象。