0 次观看 • 4:15 分钟 • April 30th, 2023
来源于患者的肿瘤类器官是由原发器官组织培育而成的微型肿瘤。移植到动物模型后，这些类器官能够保留原始肿瘤的大部分表型和遗传特征，从而实现个体化癌症治疗。例如，膀胱癌类器官对其相应原发肿瘤的多种细胞标志物呈阳性染色。
为了建立肿瘤类器官模型，首先从膀胱肿瘤类器官培养物开始。向类器官培养物中加入胶原酶悬浮液并进行孵育。胶原酶可降解基质成分。接着，加入预热的培养基以释放悬浮状态的游离类器官。在低温下离心，以中和残留的胶原酶活性，并获得类器官沉淀。
弃去含有灭活酶和降解基质成分的上清液，将沉淀物重悬于新鲜培养基中。将类器官悬液转移至含有基底膜基质的生长培养基中。随后，将类器官与培养基的混合悬液吸入注射器，注射到经手术暴露并麻醉的裸鼠膀胱前壁中。
基底膜基质的复杂网络有助于捕获类器官，并促进其与膀胱壁的整合。膀胱壁模拟了亲本肿瘤的微环境，使类器官能够发育成反映原始癌症形态学和发病机制的肿瘤。
为准备膀胱肿瘤类器官的原位移植，向24孔板中的类器官培养基中加入500微升胶原酶/分散酶。用移液器将基底膜基质和培养基反复吹打。然后，在37摄氏度下孵育20分钟。
孵育结束后，将细胞收集至15毫升离心管中，并加入5毫升预热的DMEM培养基。随后，在4摄氏度下以400 ×g离心3分钟，并吸除上清液。用1毫升DMEM重悬沉淀，将悬液转移至90毫米的培养皿中。
在显微镜下，使用 P200 移液器挑取 10 至 100 个肿瘤类器官，收集到预冷的微量离心管中。离心微量离心管后，小心去除上清液。随后将沉淀物置于冰上保存，直至小鼠准备好进行手术。在进行黏膜下膀胱壁移植前，将注射器、移液器吸头和基底膜基质置于冰上保存，待使用时取出。
小鼠麻醉后，将其置于仰卧位，并通过面罩吸入2%气化异氟烷以维持麻醉状态。用无菌纱布蘸取聚维酮碘擦拭消毒，再用70%乙醇擦拭。使用无菌手术剪在腹部中下部正中线的皮肤及肌层做一小的横向切口。从腹腔中暴露膀胱，并用浸有生理盐水的棉签支撑固定。
用含有50%高浓度基底膜基质的80微升类器官培养基重悬类器官沉淀，然后使用胰岛素注射器将悬液注入膀胱顶部的前侧。用4-0尼龙缝线缝合切口，并用聚维酮碘和70%乙醇对术区进行消毒。将小鼠置于红外线照射器下恢复10至15分钟，随后继续监测小鼠直至其恢复意识。