固相微萃取采样:一种基于探针的移植物组织样品提取技术

器官移植物的长期储存会影响其代谢特征，这是器官功能和早期器官排斥反应的指标。

要分离这些代谢物，首先取涂有生物相容性吸附剂的薄固相微萃取或 SPME 探针。将探头浸入水醇清洁溶液中，使包被的吸附剂水合并松散任何结合的杂质。

搅拌探头以去除杂质。接下来，将探头放入活化溶液中并再次搅拌。活化溶液中的化学物质会改变探针表面，增强其吸附潜力。用水冲洗探头并消毒以去除微生物污染物。

现在，将无菌和激活的探针插入器官移植物中，使组织基质覆盖整个吸附剂表面。吸附剂材料从移植物中吸引游离的极性和非极性代谢物，从而能够吸附到其表面。缩回探头并用水冲洗以去除任何残留组织。

然后，将探针放入解吸溶液中，该解吸溶液与吸附的代谢物相互作用。搅拌探针以分离捕获的代谢物并将其溶解到解吸溶液中。最后，取出探针并处理所得代谢物混合物以进行后续分析。

首先准备由 1 比 1 甲醇和水组成的预处理混合物。将 1 毫升溶液移液到每个 2 毫升玻璃瓶中，并在每个小瓶中放置一个探头。在涡流搅拌器上以 1,200 rpm 的速度搅拌小瓶 1 小时。然后，用 LC-MS 级水冲洗探头，并根据标准手术灭菌方案或在无菌处理部门对其进行灭菌。

准备提取样品时，打开无菌包装，将两个探针直接插入肾皮层，每个时间点持续 10 分钟，确保整个涂层长度被组织基质覆盖。确保跟踪每个探头的采样时间。将探头从组织中拉出，缩回探头，并立即用 LC-MS 级水冲洗涂层以去除任何残留的血液，确保冲洗掉手术部位。

要运输探头，请将它们放入单独的小瓶中并关闭它们。然后，将小瓶放入装满干冰或液氮的盒子中。将样品储存在负 80 摄氏度或立即进行解吸。

制备由乙腈和水组成的解吸溶液用于代谢组学分析，另一种由异丙醇和甲醇组成的解吸溶液用于脂质组学分析。将 100 微升溶液添加到 2 毫升标记小瓶中的插入物中，并在每个小瓶中放置一个探针。以 1,200 rpm 的速度搅拌小瓶 2 小时。然后，从样品瓶中取出探针并继续进行 LC-MS 分析。