膀胱逼尿肌平滑肌细胞分离：一种通过酶消化法从人膀胱组织标本中获取逼尿肌细胞的实验方案

位于膀胱壁内的逼尿肌平滑肌（DSM）细胞构成了膀胱的主要功能单位。这些细胞通过舒张促进尿液在膀胱内的储存，并通过收缩排出尿液。

为了分离DSM细胞，首先取收获的人类膀胱标本。清洗标本以去除任何血液和碎片残留。随后将组织固定，使其黏膜面朝上。切除脂肪、血管和黏膜层，暴露下方的逼尿肌层。然后将去除了黏膜的组织切成小片段。

用含有木瓜蛋白酶的消化液处理组织碎片并进行孵育。木瓜蛋白酶是一种蛋白水解酶，可促进消化细胞外基质中连接细胞的蛋白质，从而启动细胞在基质中的松解。随后，移除含有木瓜蛋白酶的上清液。

将胶原酶酶悬液加入组织碎片中，并在生理温度下孵育。胶原酶可降解细胞外基质，促进深部平滑肌细胞的分离。在生理温度下孵育有助于保持深部平滑肌细胞的完整性。弃去含有胶原酶的上清液。

用预冷的缓冲液洗涤组织碎片，以去除残留的酶。随后将组织碎片重悬于缓冲液中。轻柔吹打经酶处理的组织碎片，确保未释放的细胞完全解离，从而获得单细胞悬液的DSM细胞。将DSM细胞保存在低温条件下，以备后续使用。

首先检查全层尿路膀胱标本。将标本黏膜面朝上、浆膜面朝下，固定在盛有冰冻DS的150毫米圆形硅胶手性涂层培养皿上，然后通过锐性解剖仔细去除全部黏膜组织。

剪取数块无黏膜的逼尿肌平滑肌（DSM）组织。将3至6块DSM组织放入含有1至2毫升预热的含木瓜蛋白酶和二硫苏糖醇的DS溶液（DS-P）的离心管中。于37°C孵育30至45分钟，期间每10至15分钟摇动一次离心管。

孵育结束后，从试管中取出DS-P，并用冰冻的DS短暂清洗DSM组织块。将含有DSM组织块的DS转移至新试管中，弃去DS，使DSM组织块留在试管底部。向试管中加入1至2毫升含有II型胶原酶的DS或DS-C，于37摄氏度孵育，期间偶尔振荡。

弃去 DS-C，并用预冷的 DS 将酶处理后的 DSM 组织块洗涤 5 至 10 次。最后一次洗涤后，将 DS 保留在管内，用火焰抛光的巴斯德吸管轻轻吹打组织块，以释放单个 DSM 细胞。