0 次观看 • 3:35 分钟 • April 30th, 2023
在脊椎动物的肾脏中，肾单位由多个肾小球组成——肾小球是一团致密的血管网络——在机体废物过滤过程中起主要作用。
为了分离肾小球，首先取一只新解剖的小鼠肾脏。用镊子剥离肾脏表面的肾包膜，并将干净的肾脏放入新的培养皿中。接着将培养皿置于冰上，以防止肾脏组织降解。将肾脏切成小块。
接着，将剪碎的肾组织块重悬于适当的缓冲液中。先通过一个孔径较大的网筛过滤组织悬液，并将滤过液收集到新的培养皿中。重复此步骤数次，每次逐步减小网筛孔径，直至肾小球从肾组织碎片中完全分离。
最后，用所需培养基冲洗滤膜，以收集较小的被截留的肾小球，而肾组织碎片则保留在滤液中。将肾小球转移至超低吸附培养板上。使用倒置光学显微镜观察培养板。
借助移液器捕获单个肾小球，并将其转移至新的孔中。向孔中补充培养基，用于后续分析。
按照文稿中所述方法游离肾脏后，用手术镊夹住肾脏，并用另一把镊子剥离肾包膜。随后，将肾脏放入6孔培养板的孔中，每孔预先加入2毫升HBSS，并将培养板置于冰上。
接下来，将肾脏转移至一个100毫米的培养皿中，并使用两把手术刀将其切成约1至2毫米的小块。用HBSS保持肾脏碎块湿润。
接下来，将肾组织块置于一个300微米的金属筛网上，使用20毫升注射器的推杆将肾组织压过筛网。期间反复用HBSS冲洗筛网，并用血清移液管收集滤过液，转移至一个干净的培养皿中。
使用手术刀刮下筛子底部残留的所有物质，并将其转移至收集的肾组织匀浆液中。用 HBSS 将肾组织匀浆液依次通过 75 微米和 53 微米的筛子进行过滤。然后用 HBSS 清洗两个筛子，以去除所有较小的结构。
用添加20%胎牛血清的DMEM冲洗各筛子的上表面，收集筛子中残留的肾脏结构和组织材料，并将材料转移至6孔超低吸附微孔板的孔中。
将超低吸附微孔板置于倒置光学显微镜下，使用20微升移液器收集单个包封和/或去包封的肾小球。