0 次观看 • 2:42 分钟 • April 30th, 2023
肿瘤类球体是由肿瘤细胞形成的三维细胞聚集体。这些类球体可被包埋于胶原基质中，从而形成类球体包埋块。为快速冷冻类球体包埋块，首先将胶原凝胶类球体包埋块置于组织学模具的中央。
用适当的缓冲液冲洗组织块，并向模具中加入固定液。孵育以使该溶液渗透类球体并交联细胞蛋白。此步骤有助于维持类球体结构，以便进行后续操作。接着，吸除固定液。
将球状体凝胶块放入含有薄层包埋介质的新鲜组织学模具中。加入更多包埋介质，完全浸没球状体凝胶块。最后，将模具短暂浸入液氮浴中。
快速冷冻可防止类球体内部形成较大的冰晶，有助于保持类球体的完整性，避免造成机械损伤。一旦包埋介质在类球体周围凝固，即从模具中取出冷冻组织块。将冷冻的类球体组织块置于低温下保存，以备后续组织学分析。
首先，使用小镊子将胶原凝胶块及类球体从培养腔室载玻片中取出。然后，将胶原凝胶块放入一个塑料组织学模具中。用1× PBS短暂冲洗胶原凝胶块，并在室温下用含4%多聚甲醛的PBS固定30分钟。随后，在摇床上用1.5毫升1× PBS洗涤胶原凝胶块15分钟。
在新的塑料组织学模具底部涂抹一层薄薄的OCT包埋剂。然后，将固定并清洗后的胶原凝胶块放置在OCT包埋剂上，再小心地用OCT包埋剂填充模具其余部分。将模具置于4摄氏度环境中1小时。之后，将模具置于漂浮在液氮上的100毫米培养皿上进行速冻，并将样品储存在负80摄氏度条件下。