使用电穿孔法将siRNA封装入外泌体：一种基于电脉冲的siRNA外泌体装载技术

外泌体——一种纳米级的细胞来源膜囊泡——在作为双链小干扰RNA（siRNA）的治疗递送载体方面具有潜力。

进入靶细胞的细胞质后，siRNA 会结合到 RNA 诱导的沉默复合体。该复合体被激活后可识别并结合特定的 mRNA，负向调控其表达，从而介导基因沉默。

为了将siRNA包封到外泌体中，首先将电穿孔比色皿置于冰上预冷。接着，在离心管中使用合适的电穿孔缓冲液，按所需比例混合外泌体和特异性siRNA。然后，将该混合物转移至预冷的比色皿中。

关闭比色皿并将其放入电穿孔仪的比色皿架中。旋转转轮，确保比色皿与电穿孔电极接触。然后运行选定的电穿孔程序。

电穿孔过程中，电脉冲会扰动悬浮在导电缓冲液中的外泌体的磷脂双分子层，从而在外泌体膜上形成瞬时孔隙，促进siRNA扩散进入囊泡。该缓冲液有助于防止siRNA聚集。

电穿孔完成后，细胞膜上的孔隙会重新封闭，从而将siRNA包裹在内。最后，从电穿孔仪中取出比色杯，并将混合物转移至新的离心管中。将包裹有siRNA的外泌体置于低温下保存，以备后续使用。

开始电穿孔前，将电穿孔比色皿置于冰上预冷30分钟。在微量离心管中混合7微克外泌体与0.33微克siRNA。加入柠檬酸缓冲液，使总体积达到150微升。使用塑料移液枪头将外泌体-siRNA混合物加入电穿孔比色皿中，并盖上比色皿盖。

将比色皿以正确的方向放入电穿孔仪的比色皿 holder 中，并顺时针旋转电穿孔仪的转轮 180 度。选择所需的程序，然后按下“开始”按钮以启动电穿孔。显示屏将提示脉冲成功完成。

然后，将旋钮逆时针旋转180度，取出比色皿。使用塑料移液器将比色皿中的样品转移至新的微量离心管中。若样品未立即使用，请将其置于冰上或冰箱中保存，直至后续处理。