小鼠肾细胞分离:一种分离和产生肾小管上皮细胞原代培养物的技术

0 次观看3:21 分钟 • April 30th, 2023

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要分离肾小管上皮细胞或TEC,首先在培养皿中取出新鲜分离的小鼠肾脏。剥离肾包膜(肾脏周围的薄外层),去除髓质或肾脏的最内侧,留下包含肾小管和肾小管上皮细胞的皮质。

剩余的肾脏部分切成小块,并在含有胶原酶的温消化缓冲液中孵育。胶原酶分解将肾组织固定在一起的胶原蛋白,将肾小管和肾细胞释放成悬浮液。

过滤悬浮液以去除未消化的肾组织。接下来,将预冷培养基加入滤液中。较低的温度会中和胶原酶并阻止进一步的组织消化。低速离心滤液,使较致密的小管和管状细胞沉降,而其他细胞类型和杂质保持悬浮状态。

除去不需要的上清液部分并加入培养基以重悬沉淀。将悬浮液接种在胶原蛋白包被的培养皿中并孵育。游离的肾小管细胞牢固地附着在胶原蛋白上,而小管保持悬浮状态。传代培养以去除未附着的小管并获得管状上皮细胞的原代培养物。

要处理收获的肾脏,首先,取出肾包膜和髓质。然后,将两个肾脏切成小块,并在 10 摄氏度的烤箱中将它们放入 37 毫升消化缓冲液中孵育 5 分钟。

消化后,通过缓冲液通过 70 微米过滤器去除任何未消化的组织。收集消化组织后,加入10毫升培养基停止消化。接下来,将过滤后的组织悬液以50×g 离心5分钟,以沉淀管状细胞。然后,将上清液转移到新管中,加入 5 毫升培养基,并重复离心以收集任何剩余的管状细胞。

现在,将第一个沉淀重悬于 20 毫升培养基中,并以 50 x g 离心 5 分钟,以进一步纯化收集的细胞。处理上清液。然后,将两个沉淀重悬于 10 毫升培养基中。接下来,使用台盼蓝染色对活细胞进行计数。然后,将多达 1000 万个细胞接种到 60 毫米胶原蛋白包被的培养皿上,让管状细胞附着过夜。

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最后更新:1 八月 2026