小鼠肾细胞分离：一种分离与原代培养肾小管上皮细胞的技术

为了分离肾小管上皮细胞（TECs），首先将新鲜分离的小鼠肾脏置于培养皿中。剥离包绕肾脏的薄层外膜即肾包膜，并去除肾脏最内层的髓质部分，保留含有肾小管及小管上皮细胞的皮质部分。

将剩余的肾脏组织切成小块，放入含有胶原酶的预热消化缓冲液中孵育。胶原酶可降解连接肾组织的胶原蛋白，从而将肾小管和肾细胞释放到悬浮液中。

过滤悬浮液以去除未消化的肾组织。接着，向滤液中加入预冷的培养基。较低的温度可中和胶原酶，从而停止进一步的组织消化。将滤液以低速离心，使密度较大的肾小管及管状细胞沉淀，而其他类型的细胞和杂质则保留在悬浮状态。

去除此不需要的上清液组分，加入培养基重悬沉淀。将悬液接种至胶原包被的培养皿中并进行培养。游离的肾小管细胞会牢固地附着于胶原上，而肾小管仍保持悬浮状态。通过传代培养去除未贴壁的肾小管，从而获得肾小管上皮细胞的原代培养。

处理收获的肾脏时，首先去除肾包膜和髓质。然后将两个肾脏切成微小碎片，放入10毫升消化缓冲液中，在37摄氏度、温和旋转的条件下孵育5分钟。

消化完成后，将缓冲液通过70微米滤膜以去除未消化的组织。收集消化后的组织，加入10毫升培养基以终止消化反应。接着，将滤过的组织悬液在50 × g 条件下离心5分钟，使肾小管细胞沉淀。然后，将上清液转移至新离心管中，加入5毫升培养基，并重复离心步骤，以收集残留的肾小管细胞。

现在，将第一个沉淀重悬于 20 毫升培养基中，于 50 ×g 离心 5 分钟，以进一步纯化收集的细胞。弃去上清液。随后，将两个沉淀均重悬于 10 毫升培养基中。接着，使用台盼蓝染色法计数活细胞。然后，将最多 1000 万个细胞接种至 60 毫米的胶原蛋白包被培养皿中，使管状细胞过夜贴壁。