建立肾细胞癌模型：通过癌细胞肾内植入构建原位肾细胞癌小鼠模型的方案 关键词：肾细胞癌，原位小鼠模型，肾内植入，肿瘤模型，癌症研究，实验动物模型

将供体小鼠的肾细胞癌（RCC）细胞植入免疫缺陷受体小鼠的肾脏，可建立原位RCC模型。

为建立肾细胞癌原位模型，首先将麻醉后的免疫缺陷小鼠俯卧固定于解剖板上。随后使用手术刀在小鼠左侧 flank 区域做手术切口，注意保持下方腹膜完整。

通过从下方施加轻柔压力触诊小鼠。此步骤有助于透过半透明的腹膜观察肾脏。接下来，取一支含有适当培养基中肾细胞癌细胞悬液的注射器。使用针头将细胞悬液注入肾脏，注意不要损伤腹膜。

拔出针头，并使用组织粘合剂封闭切口部位。让小鼠恢复，并在预定的时间间隔监测肿瘤生长情况。最初，注射的肾癌细胞会植入肾脏中，随后这些细胞增殖形成肿瘤。

随后，少量细胞可能从原发性肿瘤脱落，并在腹膜腔内扩散。这些迁移的肿瘤细胞可侵入肺组织，并转移形成继发性肿瘤。

制备Renca肿瘤细胞时，首先用PBS洗涤细胞，然后加入含0.25%胰蛋白酶的HBSS进行消化。5分钟后，用完全RPMI培养基中和反应。将细胞转移至锥形管中进行离心，并将沉淀重悬于新鲜HBSS中。

计数后，用 HBSS 调整细胞浓度至每毫升 2 × 10⁶ 个细胞，并将细胞悬液吸入一支配有 18 号针头的 1 毫升注射器中。接着，将无菌手术巾覆盖在加热垫上，通过脚趾夹捏测试确认小鼠处于适当的镇静水平。剃除小鼠左侧 flank 部位的毛发，并在眼睛上涂抹兽用眼膏。

然后，用5%聚维酮碘消毒剂擦拭植入部位，使用无菌手术刀在左侧 flank 处做一个1至1.5厘米的切口，注意不要穿透腹膜。用剪刀将真皮层与腹膜分离，并用无菌棉纱布轻拭切口部位以清除血液。接着，用左手握住动物头部，右手托住 flank 部位，通过腹膜定位脾脏。

用右手的一个手指从下方触诊小鼠，应可看到肾脏。保持牢固抓握动物，使腹膜和肾脏处于张力状态，由助手通过完整的腹膜缓慢将0.1毫升Renca细胞注入肾脏中心。针头留置5至10秒，以减少细胞回流。然后，用一层薄薄的氰基丙烯酸组织粘合剂闭合切口。