0 次观看 • 4:18 分钟 • April 30th, 2023
静脉内显微注射有助于将目标分子递送至受体动物的血液中。向斑马鱼胚胎递送肾毒素前，首先配制适当浓度的所需肾毒素溶液。
使用细小的凝胶上样枪头，将该肾毒素溶液注入具有锋利斜面尖端的显微注射针中。将注射针垂直悬挂，使肾毒素溶液在重力作用下充满针尖。随后，将装有溶液的显微注射针牢固地安装至显微操作仪的针夹持器中。
随后，将麻醉后的斑马鱼胚胎转移至预制的显微注射模具中。将胚胎在模具中摆放整齐，使其头部位于孔内，尾部露在孔外，以提高显微注射时对尾部的可及性。接下来，将注射针尖精确地定位在胚胎附近。
将肾毒素溶液注入胚胎的尾静脉。注射的肾毒性物质通过循环系统扩散并到达肾脏等远端器官。轻柔地撤出针头。将胚胎转移至含有新鲜胚胎培养基的新培养皿中，使其恢复。将胚胎孵育特定时间。
注射后数小时内，肾毒素会在肾脏中蓄积并造成损伤，导致肾功能下降。
在注射当天，用适当的载体对照液配制所需浓度的肾毒素溶液。涡旋或轻轻混匀。随后，检查管壁及水柱顶部，确保药物已完全溶解于溶液中。
通过将细小的凝胶上样尖端插入显微注射针的尾部，向修整后的显微注射针中加入2至3微升肾毒素，并用胶带将针头垂直悬挂，使溶液在重力作用下充满针尖。
当针尖充满后，将装有样品的针固定到显微操作器上。通过在微米尺载玻片上放置一滴矿物油，并向油中注射以评估液滴大小，来测试显微注射体积。
接下来，将胚胎培养皿从培养箱中取出，并通过向胚胎培养皿中加入 5 毫升 0.2% 三卡因对胚胎进行麻醉。随后，用移液管将胚胎转移至注射模具中。将每个胚胎调整至模具的不同孔位中，使头部位于孔位最深区域，躯干沿凹槽平放，尾部伸出凹槽外。
现在，将装有液体的针头插入显微操作仪，并将针尖置于胚胎附近。轻柔地将针头插入尾静脉以进行显微注射。
该操作中最关键的步骤是显微注射。为了确保成功，注射针必须切出锋利的斜角，并小心地移动至胚胎旁的指定位置。
如果注射成功，应可见液体进入循环系统。将肾毒性物质与荧光标记的葡聚糖共同注射，可使研究人员在操作后验证注射是否成功。随后，轻柔地将针头从胚胎中取出。
将胚胎转移至干净的培养皿中，用新鲜的 E3/PTU 清洗以去除 Tricaine。随后，将胚胎孵育至所需的时间点，以评估其形态学特征，可通过甲基纤维素封片介质进行拍照记录，或根据需要进行后续实验分析。
请注意，注射后应每隔 12 至 24 小时评估一次胚胎的回收情况，以确定出现水肿的个体百分比，这通常提示肾脏损伤。