肾脏平铺制备：一种用于成年斑马鱼肾脏显微分析的解剖与平铺制备方法

成年斑马鱼具有一个附着于背侧体壁的扁平状肾脏，通过结缔组织固定。肾脏主要分为三个区域：头部、躯干部和尾部。肾脏的功能单位为肾单位，结构高度分支，最终汇入两条主要的集合管。

为了分离肾脏，首先将一只已处死的成年斑马鱼腹侧朝上放置。在覆盖鳃部的骨瓣——鳃盖——后方做一切口，以去除头部。随后，从头部切开至尾鳍基部，暴露并移除内脏器官。

现在，将体壁固定张开以暴露肾脏。解剖其下方的结缔组织，使肾脏与背壁分离。将器官转移至含有适当缓冲液的小瓶中，充分清洗以去除碎片。缓冲液有助于维持生理条件。清洗后，将用缓冲液保持湿润的肾脏置于载玻片上。

确保肾脏完全展平，必要时可在结缔组织上做切口。此步骤有助于成像时清晰观察。最后，用封片盖玻片固定组织样本，并在盖玻片四角使用少量橡皮泥固定。橡皮泥有助于防止组织变形。至此，平铺的组织样本已准备好进行显微分析。

首先，将麻醉后的鱼移出多余的溶液，并将其放置在组织或纸巾上。去除头部和内脏器官后，使用超细解剖针将体壁固定并展开。找到紧贴动物背壁的肾脏器官。

使用精细镊子将肾脏从背壁分离。轻轻将肾脏放入含有1×PBS的5毫升玻璃小瓶中，每次5分钟，清洗三次。用移液管取出肾脏，置于洁净的玻璃载片上，加入一至两滴1×PBS。

使用精细镊子将肾脏在载玻片上压平，确保无组织卷曲或翻折。可使用钨丝工具在结缔组织上做微小切口，以帮助肾脏平整放置。

接下来，在一个 18 × 18 毫米的玻璃盖玻片的每个角落放置小块的油灰状黏土。将盖玻片缓慢地置于肾脏组织上，保持轻微倾斜角度，以尽量减少气泡的滞留。如有必要，可额外添加一滴 1× PBS，以填充盖玻片与载玻片之间的空隙。