斑马鱼肾脏的脱色与预染色：一种用于成年斑马鱼肾脏染色前处理的技术 关键词：斑马鱼，肾脏，脱色，预染色，组织学染色，成年斑马鱼，肾脏制备

成年斑马鱼的肾脏是一种透明结构，位于鱼体背侧体壁附近。肾脏表面可见分散的黑色斑点，对应于散在的黑色素细胞——这些特化细胞可保护肾脏干细胞免受有害紫外线辐射的损伤。

为了脱色并为染色做准备，首先取一只已处死的成年斑马鱼。将整条斑马鱼浸入适当的固定液中，并孵育所需的时间。孵育可使固定液充分渗透鱼体，从而将组织成分固定在原位。

接下来，将斑马鱼腹面朝上放置，并切除其头部。从头部下方开始，沿腹面做一长切口，一直延伸至尾鳍。移除内脏以暴露下方的肾脏。用镊子将肾脏从背壁上分离，并将其置于玻璃小瓶中。

用浓度递增的蔗糖溶液处理解剖后的肾脏。蔗糖溶液可形成等渗环境，防止肾脏收缩。随后将肾脏置于漂白液中孵育，以去除黑色素细胞的色素沉着，这有助于在后续染色过程中更清晰地观察肾脏结构。

最后，用封闭液替换漂白液，以封闭非特异性结合位点，防止出现非特异性染色。去色素化的成年斑马鱼肾脏现已准备好进行后续染色步骤。

准备就绪后，使用精细镊子小心地将肾脏从背侧体壁分离，并将器官放入玻璃小瓶中。用 3 至 5 毫升含 0.05% Tween 的 1× PBS 溶液对分离的肾脏进行洗涤，每次 5 分钟，共洗涤三次。

接下来，移除 PBS 溶液，并用 3 毫升 5% 蔗糖溶液冲洗肾脏 30 分钟。此后，更换为 3 毫升 30% 蔗糖溶液，在 4 摄氏度下保存过夜。

第二天，移除溶液并清洗肾脏两次，然后加入 3 至 5 毫升漂白液，以去除肾脏器官上的黑色素细胞色素沉着。将玻璃小瓶置于旋转仪上，并仔细观察色素沉着的消失过程。脱色通常需要约 20 分钟，但有时可能长达 60 分钟。

如果漂白液作用时间过长，可能导致组织解体，因此建议每隔10至15分钟观察一次样本，以检查组织完整性。当肾脏的色素被去除后，用溶液洗涤两次，并在室温下用4% PFA溶液孵育1小时。

接下来，移除4% PFA溶液，并用洗涤液清洗肾脏三次。最后一次清洗后，加入3至5毫升封闭液，在室温下孵育肾脏2小时。封闭完成后，直接进行所选的染色实验方案。