利用鸡胚尿囊膜进行肾脏类器官培养：一种将小鼠肾脏外植体移植至鸡胚尿囊膜以诱导肾血管结构形成的实验技术 关键词：肾脏类器官培养，鸡胚尿囊膜，小鼠肾脏外植体，肾血管结构，器官移植，血管生成，类器官系统，发育生物学，组织工程，肾单位形成

鸡的绒毛尿囊膜（CAM）是一种高度血管化且天然免疫缺陷的结构，位于蛋壳下方。CAM 是异种移植的理想模型——即从供体生物将组织移植到另一物种受体的过程。

为在鸡胚尿囊膜（CAM）上进行肾脏类器官培养，首先取一个底部带有可渗透膜的微型培养皿。将该微型培养皿倒置，使其覆盖在培养皿中的一滴培养基液滴上，以确保膜与培养基直接接触。将小鼠肾脏外植体转移至预先润湿的膜上，并吸去肾脏周围的多余培养基。

孵育以促进肾外植体与膜的贴附。接着，取一个具有完全发育的绒毛尿囊膜（CAM）的鸡胚进行体外培养。找到位于胚胎外围的显著血管。拿起带有附着肾外植体的储液器，将其倒置在CAM上，使膜将肾外植体压紧于CAM组织表面。

向储液池中补充培养基，以支持肾外植体的生长并防止其收缩。进行长期培养。鸡胚尿囊膜血管会浸润移植的肾脏，并在肾外植体内部诱导血管化，从而促进在尿囊膜组织上重现功能性肾脏的特征。

根据您的实验需求，选取适用于6孔板或12孔板的Transwell细胞培养小室。使用Dremel工具将小室切割至适当大小，制备出一个高2毫米、带有多孔膜的塑料环。

使用手术刀或锋利的刀片去除环形物边缘的切屑。将微型储液池在70%乙醇中灭菌至少1小时。然后用蒸馏水在高压灭菌器中清洗微型储液池，并在层流罩中干燥。用PBS和培养基冲洗微型储液池。

将储存器置于含有培养基液滴的培养皿上，膜面朝上。将分离的离体胚胎肾脏或肾类器官放置在膜上。避免样品周围残留过多液体，于细胞培养孵育箱中孵育2至24小时，使其贴附。

将异种移植物移植到体外培养的8日龄鸡胚的绒毛尿囊膜上。转移微型储液器，使膜覆盖移植物。将其置于CAM的周边区域，避免覆盖胚胎本身。

然后向微型储液槽中加入培养基。将样本在鸡胚尿囊膜上培养，最长培养9天。每天更换微型储液槽中的培养基。移植后24至48小时即可观察到样本的血管化情况。