小脑延髓池手术注射：一种将肿瘤细胞直接注入小鼠中枢神经系统的方法

小鼠大脑由三层脑膜构成——最外层的硬脑膜、中间的蛛网膜以及最内层的软脑膜。

在脑的后部区域，蛛网膜和软脑膜之间存在一个充满脑脊液（CSF）的蛛网膜下腔，称为小脑延髓池。

为进行肿瘤细胞的颅池注射，首先取一只已麻醉的小鼠模型。通过去除小鼠头部腹侧表面的毛发来准备小鼠。

现在，将小鼠置于俯卧位，并将其头部固定于立体定位仪上。调整小鼠鼻部位置，使其略微向下倾斜，以使脊柱与小脑延髓池处于同一水平。

使用剪刀在脑部后端、耳部水平位置做一较小的正中切口。

小心地将浅层肌肉层拨开。小脑延髓池可被观察到，呈倒三角形，表面覆盖着透明的硬脑膜。

接下来，取一支含有循环肿瘤细胞悬液的注射器。

保持周围肌肉组织牵开，将注射器插入硬脑膜下方，刺穿蛛网膜。此步骤可将肿瘤细胞直接注射到枕大池的脑脊液中。

最后，使用伤口夹闭合切口部位，并让小鼠恢复。

首先，以每公斤体重1毫克的剂量，对小鼠进行皮下注射缓释布托啡诺。将小鼠麻醉后，准备手术。修剪手术区域及其周围足够范围的毛发，以防止毛发污染切口部位。

剃除头部整个表面的毛发，并使用无菌技术准备皮肤。然后，从部位中心向外围涂抹杀菌性皮肤消毒剂，直至充分浸润，并待其自然干燥。

调整身体位置，确保脊柱与小脑延髓池保持水平。在对尾巴施加轻微牵引的同时，用胶带固定尾根部以稳固尾巴。

使用无菌巾或带粘性的无菌塑料敷料覆盖手术区域，以防止污染。将颈部完全伸展，从耳廓之间稍靠后的位置开始，沿枕骨向下轻轻施压，用手术剪尖端沿中线向尾侧划开。

在可触及的凹陷处稍上方做一长度为3至5毫米的正中切口。用30G Hamilton注射器吸取5微升细胞悬液。使用尖端宽度为1至2毫米的钝头镊子轻轻按压小脑延髓池。

将镊尖以闭合状态插入，同时施加向下的压力并张开镊尖以分离硬脑膜。重复钝性分离操作，直至硬脑膜清晰可辨，且暴露区域内的相关血管可见。

用镊子固定并牵开周围肌肉组织。将一根30G无芯针头插入硬脑膜下方，观察针尖斜面，确保针头仅伸入至斜面稍前方即可。

缓慢推出注射器活塞，将细胞注入硬脑膜下方。若发现注射部位有渗漏，可用棉签轻轻按压。使用伤口夹或微量皮肤黏合剂闭合皮肤。

术后第一周内每天监测小鼠状况。若小鼠出现疼痛或痛苦迹象，根据兽医咨询和指示，可给予每千克体重10毫克的卡洛芬皮下注射，每12至24小时一次，最多持续5天。