JoVE 实验百科全书
癌症研究
0 次观看 • 3:17 分钟 • April 30th, 2023
胶质瘤干细胞（GSCs）是胶质瘤中的一类细胞亚群，而胶质瘤是一种起源于脑内胶质细胞的癌症。
利用荧光素酶等生物发光酶对这些GSC进行标记，有助于建立高通量成像分析方法，用于药物筛选。
为制备荧光素酶标记的GSCs，首先使用合适的生长培养基培养GSCs细胞。
离心培养物以获得细胞沉淀，并移除上清液。
向沉淀中加入适当的消化酶。这些酶可解离细胞团块，并降解残留的结缔组织，以获得单细胞悬液。
现在，将单细胞悬液离心并弃去上清液。用新鲜培养基重悬沉淀。
接下来，将所需浓度的细胞接种于培养板中。
孵育培养物，使细胞贴附于培养板上。
随后，加入所需滴度的含有荧光素酶增强型绿色荧光蛋白或EGFP基因的病毒载体，并进行孵育。
病毒与GSC表面受体相互作用，触发含有荧光素酶-EGFP的病毒RNA释放。细胞内的酶催化RNA逆转录为双链DNA，并将其整合到GSC的基因组中。
在荧光显微镜下观察时，由于EGFP发出的荧光，表达荧光素酶的细胞呈现绿色。
首先从培养基中收集胶质瘤干细胞（GSCs），在室温下以 70 × g 离心 3 分钟。去除上清液后，在 37 摄氏度下用 accutase 消化细胞 4 分钟。
使用200微升枪头反复吹打细胞，以解离并重悬细胞沉淀。将神经胶质瘤干细胞以每毫升培养基200,000个细胞的密度接种至12孔培养板的每个孔中，并过夜培养。
第二天，向孔板的每个孔中加入 30 微升荧光素酶-EGFP 病毒上清液。在 25 摄氏度下以 1,000 ×g 离心 2 小时，随后过夜培养细胞。
次日，收集GSC细胞，离心后弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞，重新接种并更换各孔中的培养基。将细胞继续培养48小时。
在荧光显微镜下观察培养板，确认出现GFP阳性细胞。