小鼠脑组织的速冻保存:一种用于组织学分析的快速冷冻完整小鼠脑标本的技术

0 次观看2:37 分钟 • April 30th, 2023

通过速冻法冷冻保存小鼠脑组织样本时,首先取一个装有异戊烷溶液(一种高导热性液体)的烧杯,将其浸入盛有液氮的容器中。

将异戊烷冷冻至溶液变得粘稠。

同时,取一个经蔗糖溶液预处理的完整小鼠脑组织样本。该处理可防止脑组织在后续步骤中发生形变。

将脑组织样本从蔗糖溶液中取出,并用吸水纸吸干,以去除残留的蔗糖。

接下来,将脑组织按所需方向置于含有包埋介质层的深冻存模具中。

在冷冻模具中用更多的包埋介质覆盖脑组织,以确保整个器官被完全覆盖。

然后,将含有包埋脑组织的冷冻模具浸入预冷的异戊烷浴中。脑组织迅速冷却至超低温,可确保脑部结构得以完整保存,且无任何变形。

现在,让脑组织样本冷冻,直至包埋介质凝固,在脑组织周围形成一层凝胶状层,以固定其位置。

冷冻后,将冷冻模具从异戊烷浴中取出,并用铝箔包裹冷冻保存的小鼠脑组织。

将样本储存在零下八十摄氏度,以备进一步的组织学分析。

为进行冷冻保存,将一个烧杯装入低温的异戊烷/2-甲基丁烷,并将该烧杯放入装有液氮的容器中。在溶剂冷却的同时,用滤纸将脑组织表面吸干,然后将脑组织放入已标记的冷冻模具中。

在冷冻模具中心小心加入约 5 毫升预冷的包埋剂,并将脑组织按所需方向放入模具中。使用洁净的镊子,迅速将冷冻模具放入预冷的异戊烷(2-甲基丁烷)中,浸泡 30 至 40 秒。

待切割介质凝固后,将冷冻模具转移至干冰上,并用铝箔包裹冷冻模具及速冻的脑组织,于-80摄氏度保存。