冷冻组织切片的固定与染色：一种用于激光显微切割的冻脑组织切片处理方法

为了在异质性小鼠脑肿瘤组织中区分特定的细胞群体以便后续分离，首先取一块载有目标冷冻保存脑肿瘤组织切片的玻片。

依次用浓度递减的乙醇孵育组织。乙醇可溶解已渗入组织的包埋介质，在固定组织的同时保持核酸的完整性。 

此外，乙醇可使组织再水化，从而在后续步骤中实现均匀染色。

现在用焦油紫对组织进行处理。焦油紫是一种碱性染料，可染色核酸等酸性细胞成分。

随后用伊红Y对组织进行复染。伊红Y是一种酸性染料，可使细胞质蛋白等碱性细胞成分着色。

该差异染色步骤有助于区分细胞质与其他细胞结构，从而识别出目标细胞。

染色后，将组织浸入浓度递增的乙醇中以脱水，避免组织过度变形。

接下来，用二甲苯清洗组织。二甲苯可置换并去除组织切片中的乙醇。

最后，在组织切片上添加适当的封片液，以保持组织形态。

处理后的组织切片已准备好用于激光显微切割——这一过程可实现从组织中精确分离特定细胞。

将切片依次浸入梯度下降的乙醇溶液中，每次30秒，随后用结晶紫溶液染色20秒，再在0.5%伊红Y溶液中染色5秒。

在伊红Y孵育结束时，使用滤纸将玻片 blot 干，并依次通过梯度乙醇浸泡对玻片进行脱水。在乙醇中浸泡60秒后，将玻片置于二甲苯容器中冲洗3分钟。

接下来，将切片置于无RNase的表面上，室温干燥10秒，然后将样本置于用无RNase水配制的封片剂中封片。10至20秒后，将切片转移至显微镜显微切割平台。