冷冻保存的组织切片固定和染色:一种处理冷冻脑组织切片以进行激光显微切割的程序

0 views • 2:41 min • April 30th, 2023

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为了区分异质小鼠脑肿瘤组织中的特定细胞群以进行后续分离,首先取载玻片,载有冷冻保存的感兴趣的脑肿瘤组织切片。

降低浓度的乙醇中依次孵育组织。乙醇溶解已经穿透组织的包埋培养基并固定组织,同时保持核酸完整性。

此外,乙醇使组织再水化,从而在后续步骤中实现均匀染色。

现在,用甲酚紫处理组织。甲酚紫 - 一种碱性染料 - 染色酸性细胞成分,例如核酸。

此后,用曙红 Y 复染组织。曙红 Y - 一种酸性染料 - 对细胞质蛋白等基本细胞成分进行染色。

这种差异染色步骤有助于区分细胞质和其他细胞结构,从而能够识别感兴趣的细胞。

染色后,将组织浸入浓度不断增加的乙醇中,使组织脱水并避免组织过度变形。

接下来,用二甲苯清洗组织。二甲苯从组织切片中置换并去除乙醇。

最后,在组织切片上添加合适的安装溶液以保持组织形态。

处理后的组织切片已准备好用于激光显微切割 - 该过程可以从组织中精确分离特定细胞。

载玻片浸入 30 秒的连续下降乙醇浸泡中,然后在 0.5% 曙红 Y 溶液中进行结晶紫溶液染色 20 秒和 5 秒。

在曙红Y孵育结束时,使用滤纸将载玻片吸干,并在连续上升乙醇浸泡中使载玻片脱水。乙醇浸泡60秒后,在二甲苯容器中冲洗载玻片3分钟。

接下来,在室温下将载玻片在不含 RNase 的表面上干燥 10 秒钟,然后将样品安装在用不含 RNase 的水制备的封片介质中。10 至 20 秒后,将载玻片转移到显微镜显微解剖平台上。

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Last updated: 18 July 2026