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癌症研究
0 次观看 • 3:58 分钟 • April 30th, 2023
颅窗植入是一种外科手术，通过盖玻片封闭暴露的脑区。植入的成像窗口可实现对脑部长期、高分辨率的活体成像观察。
首先，将麻醉后的小鼠固定在立体定位仪中。
使用加热垫维持其体温。
接下来，剃除小鼠的头皮毛发并消毒暴露的皮肤。
在颅骨表面做一个环形切口，并刮除下方的骨膜——一层纤维性结缔组织。
随后，在手术区域应用适当的血管收缩剂和麻醉溶液，以减少后续步骤中的出血。
使用氰基丙烯酸酯胶水将皮肤边缘固定在颅骨上。
然后，在解剖显微镜下观察颅骨。
在目标区域钻出浅槽，直至骨瓣松动。用皮质骨缓冲液处理槽部，防止组织脱水。
轻轻抬起骨瓣，形成骨窗以暴露下方的脑组织。
现在，去除包裹大脑的最外层膜——硬脑膜。清除缓冲液，并滴加硅油以防止窗口下方产生气泡。
使用胶水在暴露区域上覆盖盖玻片，确保脑组织与盖玻片之间的距离最小。
植入颅窗的小鼠已准备好进行脑部成像。
在确认麻醉后的成年小鼠对脚趾夹捏无反应后，将小鼠固定于立体定位仪上，并使用鼻夹和两个耳杆固定头部。
使用加热灯维持动物体温，并在其眼睛上涂抹眼膏。用锋利的剪刀剃除从眼睛到颅底的颅骨部位毛发，并用70%乙醇对暴露的皮肤进行消毒。
以环形方式切开皮肤，用棉签刮除暴露的骨膜。在手术区域滴加一滴1%利多卡因与1:100,000浓度肾上腺素的混合液，作用5分钟后，用棉签吸除多余液体。
使用氰基丙烯酸酯胶水将皮肤边缘粘附到颅骨上，并将立体定位仪置于具有4倍放大倍数的解剖立体显微镜下。
接下来，在右侧顶骨上小心地钻一个直径为5毫米的浅表环形凹槽，并向凹槽内滴加一滴皮层缓冲液。
使用细镊子抬起颅骨瓣以观察脑表面，并使用弯头锥形超细尖镊子去除硬脑膜。若发生出血，使用可吸收明胶海绵实现止血。
为制备颅骨成像窗口，用一滴硅油替换颅骨开窗部位的皮层缓冲液，以避免窗口下方产生气泡。
用一个6毫米的盖玻片封闭暴露的大脑，并在盖玻片与颅骨之间涂抹氰基丙烯酸酯胶水。然后，使用精细镊子轻轻将盖玻片压向颅骨。