0 次观看 • 3:05 分钟 • April 30th, 2023
在实体瘤释放的某些化学趋化因子作用下，肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）等免疫细胞会浸润至实体瘤内部。随后，这些 TAMs 会促进肿瘤的进展。
为了在体外研究肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）与肿瘤细胞之间的相互作用，首先取一个带有膜插件的多孔板。这种设置可暂时将孔分为两个区室。
接下来，将 TAMs 悬液加入 transwell 的上层室中。
在 transwell 的下室中加入含有肿瘤细胞分泌的化学趋化因子的条件培养基。
将培养板孵育所需的时间。
孵育过程中，化学调节剂会吸引肿瘤相关巨噬细胞（TAMs），从而通过化学诱导的趋化作用，促使TAMs穿过孔径插入膜向下方腔室迁移。
现在，从孔中取出插入物。将含有迁移的TAM群体的条件培养基转移至合适的培养板，用于荧光检测。
使用含有荧光染料的裂解缓冲液处理细胞。该缓冲液可裂解巨噬细胞。最终，染料分子会结合到核酸上，产生增强的荧光信号。
最后，使用荧光酶标仪扫描该培养板。 荧光信号较强表明巨噬细胞通过化学诱导的趋化作用成功迁移。
首先，将所需的材料恢复至室温。向每个插入孔中加入 250 µL 制备好的 MV-4-11 细胞。接着，向 24 孔板的下室中分别加入 400 µL 的条件培养基或普通培养基，确保每个样本设置三个重复孔。
在37摄氏度、5%二氧化碳条件下孵育4小时。然后，轻轻敲击同一孔内壁上的插入物，并弃去插入物。用移液器轻轻吹打孔中的细胞上下混合3次。
将225微升该细胞悬液转移至适用于荧光检测的黑色壁96孔板的孔中。随后，按1:75的比例用4倍裂解缓冲液稀释CyQuant染料。短暂涡旋振荡后离心溶液。
将75微升该溶液转移至96孔板的每个孔中，在室温下孵育15分钟。使用荧光酶标仪读取荧光信号，并按照文本方案中所述分析数据。