DNA合成检测：利用放射性氚标记胸腺嘧啶掺入法评估增殖细胞中DNA合成的技术

首先取一个含有贴壁细胞的多孔板。

用含有氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷（一种放射性胸腺嘧啶脱氧核苷）的培养基处理这些细胞  孵育。

孵育过程中，活跃增殖的细胞会掺入放射性标记的胸腺嘧啶脱氧核苷。该胸腺嘧啶脱氧核苷与腺苷相对配对，从而在增殖细胞中生成放射性标记的DNA。

从孔中移除用过的培养基。加入裂解缓冲液以裂解细胞，并将DNA释放到悬液中。

通过将收集器的收集管放置在微孔板的孔上方，完成细胞收集装置的组装。

施加负压以吸取孔中悬浮的DNA。该DNA会沉积在滤纸上，形成特定的斑点。

用打孔器切下带有DNA斑点的滤纸片，将这些滤纸片分别转移到闪烁瓶中。

用闪烁液覆盖滤纸。将小瓶放入液体闪烁计数器中。

在计数器内部，标记的DNA通过放射性衰变释放能量。该能量被闪烁液组分吸收。最终，闪烁液组分开始传递脉冲，这些脉冲随后被传感器吸收。

检测到的放射性强度决定了细胞分裂的程度。

在24孔板中每孔接种100,000个细胞，设三个重复孔。培养46小时后，向培养基中加入氚标记的胸腺嘧啶核苷，在37摄氏度下继续孵育2小时。

然后，吸除培养基后，加入300微升预热的0.25%胰蛋白酶-EDTA，于37摄氏度孵育20分钟，以解离细胞并释放DNA。随后，启动细胞收获仪和泵。

将滤纸放入细胞收集器中。将细胞收集器的收集管置于一个空的空白托盘中。然后，按下预洗键以润湿滤纸。将收集管放入样品孔中，开始操作。

使用热光源烘干滤纸，并将相应的样品瓶排列在托盘上。将滤纸打孔后的样品放入样品瓶中，然后向每个样品瓶中加入 2 毫升液体闪烁液。

在使用闪烁计数器测定每分钟计数以反映活跃的DNA合成之前，先将样品小瓶在闪烁计数器中孵育1小时。