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癌症研究
0 次观看 • 4:02 分钟 • April 30th, 2023
神经球是由神经前体细胞（NPCs）形成的非贴壁性球状聚集体。
在特定的贴壁培养条件下，神经前体细胞可能从神经球中自发迁移出来。
为了评估神经前体细胞（NPCs）的迁移反应，首先在合适的培养基中制备所需密度的NPC悬液。
接下来，将细胞悬液接种至含有培养基的培养板中，并进行孵育。
培养基中的特定生长因子支持细胞的增殖。此外，由于不存在包被基质，细胞保持悬浮于培养基中，从而促进其形成称为神经球的三维细胞聚集体。
当神经球达到所需大小后，收集神经球。
离心并用稀释后的培养基重悬神经球沉淀。
然后，将神经球悬液接种至包被有细胞外基质的培养板中，加入稀释的培养基，并进行培养。
培养过程中，神经球会黏附到细胞外基质上。
随着时间推移，由于细胞外基质成分的作用，部分神经前体细胞开始从神经球核心迁移出去。
现在，移除培养基并固定细胞。
拍摄显示细胞迁移的神经球相差图像。
使用合适的软件，测量总神经球的面积和内细胞团的面积。
最后，用神经球的总面积减去内部细胞团的面积，以计算神经前体细胞从神经球迁移的平均距离。
为了形成神经球，将1毫升100%扩增培养基移液至未包被基质的35毫米培养皿中。然后，在每个培养皿中加入一百万个神经前体细胞，并在37摄氏度下孵育48至96小时。
为准备神经球迁移用培养板，将ECM模拟凝胶等分试样溶于6毫升30%扩增培养基中。在6孔板的单个孔中加入1毫升含30%扩增培养基的ECM模拟凝胶，然后于37°C孵育30分钟。
接种神经球时，使用移液器从35毫米培养皿中收集含细胞的培养基，并转移至锥形管中。随后，在100 ×g 条件下离心，使神经球沉淀。然后，将沉淀物重悬于1至3毫升预热的30%扩增培养基中。
接下来，将重悬的神经球取 200 微升加入含有 ECM 模拟凝胶和 30% 扩增培养基的 6 孔板中，并轻轻摇动培养板。然后在 37 摄氏度下孵育 48 小时。吸除含 30% 扩增培养基的 ECM 模拟凝胶，随后使用 4% 多聚甲醛固定细胞 30 分钟。
为分析神经球，使用10倍放大倍数的相差显微镜设置拍摄图像。利用美国国立卫生研究院（NIH）ImageJ 软件测量神经球的平均迁移距离。在 ImageJ 中，使用自由手绘线条工具勾勒神经球的外缘轮廓。
然后，使用测量功能计算轨迹面积，并勾勒出类球体的内细胞团。从总神经球面积中减去内细胞团面积，以量化平均迁移距离。