血脑屏障模拟物通透性检测：一种用于评估示踪分子在血脑屏障模拟物中通透性的体外检测方法

血脑屏障（BBB）由内皮细胞、周细胞和星形胶质细胞组成，可调控生物分子的流入与流出，并有助于维持大脑稳态。

为了评估血脑屏障（BBB）模型在体外的通透性，首先准备一个体外BBB模型，该模型由附着在多孔膜插入物上层（即血液侧）的内皮细胞和附着在膜基底侧（即脑侧）的星形胶质细胞组成。

内皮细胞与其细胞外基质与星形胶质细胞接触，形成血脑屏障（BBB）模拟结构。

将所需体积的培养基从血液侧和脑侧转移至黑色多孔板，以获得最佳的荧光检测效果。

用含有小分子量荧光示踪剂分子的培养基替换培养物血液侧的培养基。

在培养过程中，内皮细胞与星形胶质细胞之间的接触增强了细胞屏障，稳定了紧密屏障，限制了示踪分子向培养物脑侧的扩散。

此外，在预定的时间点，从血液侧和脑侧收集适量的培养基。更换两侧的培养基，以维持培养基体积。

最后，使用多孔板读数仪测量所收集培养基的荧光强度，以评估血脑屏障模型的通透性。

脑侧较低的荧光强度表明细胞屏障的通透性较低。

首先，从血脑屏障模型的血液侧和脑侧分别收集 100 微升培养基，并转移至各自的平底黑色 96 孔板中，用于后续荧光检测。

接下来，用不含添加剂的EBM培养基配制50微摩尔的荧光素钠溶液，注意每孔需准备2.5毫升。将该溶液预热至37摄氏度，然后用含有此荧光素钠溶液的培养基替换插入式培养小室血管侧的原有培养基。培养基更换后立即启动计时器。

在5分钟、30分钟、60分钟和120分钟时，小心从插入物的血液侧和脑侧分别收集100微升培养基。将每个样品转移至相应的黑色96孔板中的不同孔中。使用酶标仪定量测定所收集样品的荧光强度。