基于自动毛细管电泳的游离DNA片段大小分布分析：一种基于DNA微芯片的方法，用于研究从生物液体中分离的DNA片段的大小分布

将死的细胞会向细胞外释放无细胞或游离DNA（cfDNA）片段。为了分析cfDNA片段的大小分布，首先使用多孔DNA芯片——一种微型毛细管电泳系统。芯片中的每个孔底部都含有大量微流控分离通道。

将多糖凝胶基质和荧光染料混合物加入芯片上指定的加样孔中。将芯片放置在配备空注射器的预灌装装置上。关闭预灌装装置，并下压活塞以产生向下的压力。这有助于使黏稠的凝胶从加样孔进入相应的分离通道。

打开装置，将剩余的孔用cfDNA悬浮液和已知大小范围的DNA ladder填充。将芯片安装到片段分析仪上。强电压驱动cfDNA悬浮液从样品孔进入预先装载了凝胶基质的分离通道，在通道中DNA与染料结合而被染色。

当DNA从阴极向阳极移动时，较小的DNA片段在凝胶中迁移得更快，而较大的片段迁移得更慢。这导致DNA片段按大小分离。检测器检测片段的相对荧光强度，将其与DNA标记物（DNA ladder）进行比较，并生成电泳图谱——一种显示cfDNA大小分布的图形。

为了分析DNA片段的大小，首先将底板固定到芯片预处理工作站上，并将夹子调节至最低位置。将一块新的高灵敏度DNA芯片放置到芯片预处理工作站上，向“G”芯片孔底部加入9微升凝胶-染料混合液。将活塞定位在1毫升处，然后关闭芯片预处理工作站。扣紧锁扣直至听到咔嗒声，将计时器设定为60秒，然后下压活塞直至被夹子固定住。

精确等待60秒后，使用夹子释放装置释放活塞。当活塞回退至至少300微升刻度处时，等待5秒，然后缓慢将活塞抽回至1毫升位置。打开芯片预润站，吸取9微升凝胶-染料混合物，并将凝胶转移至高灵敏度DNA芯片“G”孔的底部。

加入DNA标记物时，向泳道孔和11个样品孔中各加入5微升DNA标记物。加载DNA分子量标准和样品时，在DNA分子量标准孔中加入1微升DNA分子量标准，在已使用的样品孔中加入1微升样品，在未使用的样品孔中加入1微升标记物。将高灵敏度DNA芯片水平放置于适配器中，以每分钟2,400转的速度涡旋振荡60秒，注意避免损坏固定高灵敏度DNA芯片的凸起部分。

涡旋混匀后，确认电极盒已正确插入，并且芯片选择器已定位至双链高灵敏度DNA。小心将高灵敏度DNA芯片装入插槽中，并在关闭盖子前确认电极盒已准确嵌入芯片的孔中。片段分析仪软件界面将显示一个芯片图标，表示芯片已插入且盖子已关闭。

开始分析时，打开检测菜单并选择双链DNA高灵敏度检测。将样品名称输入表格中，然后点击“开始”以启动芯片运行。运行结束后，应立即按照良好实验室规范取出并丢弃芯片。