0 次观看 • 5:06 分钟 • July 8th, 2025
间充质干细胞（MSCs）可通过基因工程改造以表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL），该配体可结合肿瘤细胞上的特定受体，从而诱导肿瘤细胞凋亡。
为了将这些间充质干细胞（MSCs）递送至荷瘤小鼠模型，首先制备负载表达TRAIL的MSCs的生物聚合物支架。接着，将携带荧光标记脑肿瘤的麻醉小鼠固定于立体定位仪上。该小鼠已预先建立颅窗，以便进入脑组织。
使用加热垫维持小鼠的体温。对手术部位进行消毒，并在头皮上做正中切口。清除皮下脂肪以暴露颅窗。剥离颅窗上的硬脑膜，暴露下方的实质组织和肿瘤。
现在，在荧光体视显微镜下观察荧光标记的肿瘤组织。从脑组织中吸出荧光肿瘤组织。用生理盐水冲洗，以恢复生理pH值。将接种了间充质干细胞（MSC）的支架植入切除腔内。使用适当的止血剂固定支架位置。缝合切口，并让小鼠恢复。
植入后，残余肿瘤病灶内的肿瘤细胞会分泌可溶性因子，这些因子促进间充质干细胞从支架向肿瘤细胞迁移。间充质干细胞分泌的TRAIL蛋白与肿瘤细胞上的特异性受体结合，诱导肿瘤细胞发生凋亡。
首先将立体定位仪放置在荧光解剖显微镜的载物台上。然后，通过异氟烷鼻罩接头持续供给吸入性麻醉剂，将麻醉后的小鼠固定在立体定位仪上。使用加热垫维持小鼠体温。在眼睛上涂抹眼膏以防止角膜干燥。随后，用三遍酒精棉片和三遍碘伏棉片依次对头皮切口部位进行消毒。
对每只肢体进行足趾捏压反射测试，并确认无反应，以确保麻醉效果充分。使用镊子夹住并轻轻提起头皮。用手术剪沿中线做一条头尾方向的直线切口后，用PBS冲洗切口部位，并以棉签以环形刷拭动作清除皮下脂肪。
将皮肤摆放至先前建立的颅窗完全可见的位置。使用18号针头在颅窗边缘内侧轻轻刺破硬脑膜。重复操作，直至切口完整地沿颅窗内缘延伸。用精细镊子将硬脑膜剥离并移除，暴露出下方的脑实质和肿瘤。
接下来，调暗室内灯光并打开体视显微镜的荧光模式。定位表达mCherry和萤火虫荧光素酶的U87肿瘤。将一个200微升移液器吸头连接至真空泵管路末端，然后打开真空泵。通过轻柔抽吸荧光组织，直至无荧光信号残留，以切除肿瘤。为控制出血，使用冷的PBS冲洗，并用棉签施加稳定压力止血。
植入支架前，使用生理盐水、棉签施加稳定压力，和/或使用止血剂（如 SURGICEL）控制出血。若未妥善控制，可能形成危险的血肿。切除后，关闭真空泵并丢弃移液枪头。关闭荧光，打开室内照明。植入前立即缓慢将接种了间充质干细胞（MSC）的聚乳酸（PLA）支架浸入磷酸盐缓冲液（PBS）中，以去除不需要的培养基及相关成分。将支架植入切除腔内。
如有需要，加入 1 微升纤维蛋白原，随后加入 1 微升凝血酶，以固定支架位置。在硬脑膜已移除且颅窗的骨瓣已被丢弃后，通过缝合皮肤并涂抹外科胶水来闭合伤口。将动物撤离吸入性麻醉剂，并将其置于加热表面使其恢复。