在图案化神经元上共培养胶质母细胞瘤细胞：一种体外监测胶质母细胞瘤细胞在大鼠海马神经元上迁移的技术

胶质母细胞瘤具有类似干细胞的细胞，这些细胞可沿着有髓神经元的轴突束迁移，侵入大脑的远端区域。为了在体外重现胶质母细胞瘤（GBM）细胞在神经元上的迁移行为，首先取一片玻璃盖玻片。

通过氧气等离子体处理激活盖玻片，并用功能化试剂进行预处理。该处理有助于在后续步骤中更方便地接触化学物质。将聚乙二醇化溶液加入盖玻片并孵育。该溶液可覆盖盖玻片，防止神经元在非特定位点发生黏附。

将光引发剂聚合物滴加到盖玻片上，并将其安装至成像室中。将成像室置于荧光显微镜的载物台上。一旦进入显微镜内部，紫外光照会在预设微图案对应的位置局部激活光引发剂分子。

活化的光引发剂分子会切割下方的PEG层，形成所需的图案。接着加入层粘连蛋白溶液并进行孵育。层粘连蛋白是一种糖蛋白，会在PEG层被去除的特定位置沉积。将含有大鼠海马神经元的培养基接种到盖玻片上。

孵育以使神经元黏附于包被有层粘连蛋白的阵列上，从而获得神经元微图案化盖玻片。将荧光标记的胶质母细胞瘤（GBM）细胞悬液接种至微图案化神经元上。成像观察荧光标记的GBM细胞在神经元上的迁移。

为制备微图形化基底，将18毫米圆形玻璃盖玻片在空气或等离子体中活化处理5分钟，随后将盖玻片放入干燥器中，加入100微升3-氨基丙基三乙氧基硅烷，反应1小时。然后加入浓度为100毫克/毫升的Peg-SVA溶液，孵育1小时以实现凝胶沉积。孵育结束后，在载玻片中心加入3微升PLPP和50微升无水乙醇，静置直至完全干燥。

进行玻璃载玻片微图形化时，将盖玻片安装至Ludin腔室中，并将腔室置于配备自动聚焦系统的显微镜载物台上。成像后，将微图形化图像载入软件中。在自动紫外光照序列完成后，使用移液器以PBS对盖玻片进行充分冲洗，彻底去除PLPP。随后，将盖玻片与50微克/毫升的层粘连蛋白（laminin）孵育30分钟，再用PBS再次冲洗，操作如图所示。

在最后一次洗涤后，用神经元细胞培养基重新水合微图形盖玻片，以在微图形盖玻片上建立胚胎大鼠海马神经元培养。每平方厘米微图形盖玻片接种5 × 10⁴个悬浮于含3%马血清的Neurobasal培养基中的大鼠海马神经元，在37°C、5%二氧化碳培养箱中培养24小时。将解离的胶质母细胞瘤细胞在1,000 rpm条件下离心5分钟，并将沉淀重悬于胶质母细胞瘤细胞培养基中。随后，将1 × 10³个GBM细胞接种至微图形化神经元上。