小鼠模型中治疗性神经干细胞（NSCs）的鼻内递送：一种将携带溶瘤病毒的NSCs靶向递送至脑肿瘤小鼠模型的实验方法

首先，将神经干细胞（NSCs）培养物置于低氧条件下。这种预处理可增强NSCs的增殖能力及靶向肿瘤的能力。接着，收集NSCs并用所需浓度的条件性复制型溶瘤病毒进行处理。孵育以使病毒载入细胞内。

现在，离心培养物以去除未结合的病毒。将携带病毒的神经干细胞重悬于适当的缓冲液中。同时，将一只麻醉后携带脑肿瘤的小鼠置于仰卧位，以便更容易接触鼻孔。将携带病毒的神经干细胞小心地滴入小鼠的每个鼻孔，短时间间隔内重复操作。

让小鼠恢复。通过鼻内给药的神经干细胞（NSCs）可绕过血脑屏障进入大脑。在大脑内，病毒在这些预处理的细胞中复制，并迁移至肿瘤部位，从而躲避免疫系统的攻击。随着时间推移，从神经干细胞释放的病毒颗粒会与肿瘤细胞表面过表达的特定细胞表面受体相互作用并结合。

病毒内化后，这些条件性复制病毒优先在肿瘤细胞中复制并导致细胞裂解。裂解的肿瘤细胞释放出病毒颗粒，进而感染周围的肿瘤细胞，引发感染和肿瘤细胞裂解的级联反应。细胞裂解释放出肿瘤抗原，激活针对肿瘤细胞的免疫反应。

为了用溶瘤病毒加载人神经干细胞，根据标准的腺病毒转染方案，在室温下以每细胞50个条件复制型腺病毒颗粒感染干细胞，持续2小时，并定期轻敲培养容器。随后，用新鲜培养基洗涤细胞三次，以去除未结合的病毒颗粒，并将细胞重悬于无菌生理盐水中，用于鼻内递送。

当细胞经实验所需的方式修饰后，将麻醉的荷瘤动物仰卧置于加热垫上洁净的铺巾上，并在动物头部下方放置一个带衬垫的枕头，以保持鼻孔处于直立角度。枕头材料应选用可酒精擦拭的塑料或一次性卷纸巾，以避免动物间的交叉污染。

将小鼠固定后，使用微量移液器向第一只小鼠的每个鼻孔内各注入2 µL目标实验性人神经干细胞悬液，每次给予下一剂量细胞前，需通过肉眼确认液滴已被吸入。依次对每只小鼠重复上述给药操作。随后等待5分钟，再进行下一轮细胞注射。完成全部四轮细胞给药后，将动物置于恢复室中持续监测，直至完全恢复。