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首先，将神经干细胞或NSC的培养物置于低氧条件下。这种预处理有助于增强 NSC 增殖和肿瘤靶向能力。接下来，收获NSC并用所需浓度的条件复制溶瘤病毒进行处理。孵育以将病毒加载到细胞中。
现在，离心培养物以去除未结合的病毒。将载有病毒的NSC重悬于合适的缓冲液中。同时，将麻醉的荷脑肿瘤小鼠置于仰卧位，以便更容易进入鼻孔。小心地将载有病毒的NSC施入小鼠的每个鼻孔，以短时间间隔重复。
让鼠标恢复。鼻腔内给药的 NSC 绕过血脑屏障进入大脑。在大脑内部，病毒在这些预处理细胞内复制并迁移到肿瘤部位，保护自己免受免疫系统的侵害。随着时间的推移，从 NSC 释放的病毒颗粒相互作用并与肿瘤细胞上过度表达的特定细胞表面受体结合。
病毒内化后，这些条件复制病毒优先在肿瘤细胞中复制并引起细胞裂解。裂解的肿瘤细胞释放病毒颗粒，感染周围的肿瘤细胞，导致一连串的感染和肿瘤细胞裂解。细胞裂解暴露肿瘤抗原，激活针对肿瘤细胞的免疫反应。
要用溶瘤病毒加载人类神经干细胞，请根据标准腺病毒转染方案，在室温下用每个细胞 50 个有条件的腺病毒病毒颗粒复制干细胞 2 小时，并定期敲击。然后，用新鲜培养基洗涤细胞三次，以去除任何未结合的病毒颗粒，并将细胞悬浮在无菌盐水中进行鼻内给药。
当细胞根据实验上适当的方式进行修饰后，将麻醉的荷瘤动物置于仰卧位，放在加热垫上的干净窗帘上，并在头部下方放置一个带衬垫的枕头，以保持鼻孔处于直角。枕头材料应为可擦拭酒精的塑料或一次性卷起的纸巾，以避免杂交动物污染。
当小鼠就位时，使用微量移液器将2微升感兴趣的实验性人类神经干细胞群分配到第一只小鼠的每个鼻孔中，在应用下一体积的细胞之前目视确认液滴的抽吸。依次向每只鼠标重复递送。然后，等待 5 分钟并应用下一轮细胞。当所有四轮细胞都施用完毕后，将动物置于监测室中直至完全恢复。
