利用SB介导的转座诱导胶质母细胞瘤：一种通过转座子介导的SB质粒整合至新生小鼠脑部以建立新型小鼠模型的技术

首先取一支含有质粒混合物的离心管。其中，睡美人（sleeping beauty，SB）转座子质粒经过基因工程改造，携带一个可移动的转座元件，该元件包含一个人源性胶质母细胞瘤诱导型癌基因，该癌基因位于两个反向重复序列之间。此外，该混合物中还含有 SB 转座酶质粒，该质粒具有一个可表达转座酶的元件。

现在，向离心管中加入适量的转染试剂。用装有微针头的注射器吸取注射混合液。接下来，将麻醉后的小鼠幼崽俯卧位固定在立体定位仪上。观察幼崽头部区域，以定位颅骨缝。将微针头置于颅骨缝上方。

将混合物注射到侧脑室——脑实质内的一个腔隙。随后，溶液扩散至脑实质中，其中转染试剂分子可促进质粒进入细胞内。一旦进入细胞，转座酶质粒即表达转座酶蛋白分子，后者识别反向重复序列并切除转座子元件。

可移动遗传元件DNA随后重新插入幼鼠基因组DNA的TA重复区域。基因转座导致脑细胞发生癌性转化，从而在小鼠脑内引发胶质母细胞瘤的形成。

实验前3至4周，将一只雄性小鼠和一只雌性小鼠放入同一个繁殖笼中进行配种。笼中放置一个彩色塑料小屋，以丰富环境并提高交配成功率。一旦确认雌鼠怀孕，应立即移走雄鼠，并在交配后第18天开始密切观察雌鼠的分娩情况。确保在分娩前后有合适的代孕母鼠可供使用。

在出生后第一天进行脑室内注射。首先将含有转座子质粒的DNA混合液分装，取20微升，使DNA终浓度为每微升0.5微克，以此配制注射液。接着，向DNA溶液中加入20微升PEI溶液，室温孵育20分钟至1小时，随后将混合液置于冰上保存。

对于注射针，将一个10微升注射器连接到斜角为12.5度的30号皮下注射针头上。然后，将注射器连接至自动注射泵。用10微升水测试装置，并确保排空注射器。现在，使用干冰和酒精混合物冷却新生动物立体定位仪。当温度降至2至8摄氏度时，即可进行注射。

将幼鼠置于冰上2分钟以进行麻醉。在幼鼠冰镇期间，用注射液填充注射器。麻醉完成后，将幼鼠转移至固定架上，并用覆盖纱布的耳杆固定其头部。检查颅骨背侧是否水平且与框架表面平行，同时确保颅缝清晰可见。

如果幼鼠头部固定得不够牢固，在注射过程中头部会发生移动；而如果将头部在框架的耳杆之间夹得过紧，则无法看到人字缝，且头部内部的压力会导致注射液外漏。

用固定架牢固夹住幼鼠后，用70%乙醇擦拭其头部。然后，降低针头并调整其位置，使其接触λ点。接着，将针头抬起，并向侧方移动0.8毫米，再向前移动1.5毫米。随后再次降低针头，直至其轻微压陷皮肤。记录该位置的坐标。然后，将针头再向下插入1.5毫米，穿过皮肤和颅骨，进入侧脑室的皮层区域。

在此处，90秒内注入0.75微升，然后等待1分钟使溶液扩散。等待期间，可对下一只待注射的幼鼠进行麻醉。等待结束后，缓慢提起针头。随后将幼鼠转移至加热灯下的恢复区域。从麻醉到开始保温的时间必须少于10分钟；越快越好。

观察其呼吸情况，必要时可轻轻摩擦幼崽的四肢以刺激呼吸。待幼崽体温恢复、肤色转为红润且呼吸平稳后，将其放回母体身边。