心肺复合物脱细胞:一种从小鼠模型中脱细胞心脏和肺的技术

0 views • 5:17 min • July 8th, 2025

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脱细胞使器官的细胞成分消失,使 ECM 结构完好无损。这有助于保护器官的 3D 结构。对于脱细胞程序,将安乐死的小鼠置于仰卧位。解剖小鼠并暴露心肺复合体。

扎除主动脉和肺循环主要血管外的所有源自心脏的主要血管。此步骤可防止后续灌注过程中液体泄漏。在气管中创建一个开口,并通过该开口插入导管。从底部插入降主动脉,直到导管到达主动脉弓。

缝合导管以固定其位置并将它们连接到灌注泵。开始用去离子水灌注。通过主动脉灌注可以有效地从整个心脏脉管系统中去除血液。最终,水进入通向肺部的肺动脉。

肺脉管系统中完全清除血液后,停止水灌注并用从温和到强的不同洗涤剂溶液代替。该过程裂解释放细胞内成分的细胞,使心脏和肺部看起来半透明。

再次用去离子水灌注以去除任何残留的洗垢剂分子。将脱细胞的心肺复合物储存在含抗生素的溶液中,以确保较长的保质期。

首先用理发器剃掉被安乐死的小鼠的胸部、腹部和背部。用 70% 乙醇对该区域进行消毒。然后,将鼠标固定在聚苯乙烯托盘上,伸展其前肢和后肢,以及头部和尾部。将其放在显微外科显微镜下。

使用梅奥直型剪刀,从下颌下区域到下腹部做一个皮肤切口,然后皮下解剖以暴露胸壁和腹膜。然后,用显微外科剪刀沿胸壁两侧第六肋间剪开胸大肌和胸小肌。

用直型剪刀沿着前面的切口剪断胸骨。然后,通过沿其长轴切割胸骨来完成胸骨切开术。抬高并固定胸壁两侧,以暴露心肺复合体。使用圆头微型镊子将胸腺和周围的脂肪组织从附件上轻轻拉下来,然后用微剪刀切割食道。

用锋利的微型镊子将头臂静脉和头臂动脉分开。然后,将左颈总动脉和左锁骨下动脉与下层组织分开,以方便结扎和烧灼。使用微型持针器和锋利的微型镊子和 9-0 缝合线在头臂左颈总动脉和左锁骨下动脉的出现上方缝合。烧灼头臂静脉。

使用微剪刀,通过切开韧带来打开入口。将一根 27 号导管引入气管并轻轻推动,直到气管分支到支气管中,注意不要破坏支气管。使用 6-0 缝合线,在气管周围缝三针以固定导管。

第 12 胸椎的高度切片小鼠。降主动脉在脊柱的前方延伸,应与脊柱一起在这里切片。逆行插入主动脉并推动导管直至到达主动脉弓。使用缝合线,在导管尖端下方 5 毫米处开始在主动脉周围缝四针。

使用硅胶管和下部连接器将鼠标连接到泵系统。用每分钟 200 微升的去离子水灌注 15 分钟。然后,将灌注剂改为在去离子水中稀释的0.5%DOC并灌注过夜。第二天,将灌注剂改为0.1%SDS稀释在去离子水中并灌注8小时。然后,用去离子水灌注24小时,洗掉SDS和DOC。

通过

切片胸部的附着物来切除脱细胞的心脏和肺。将组织储存在含有 1% 青霉素-链霉素和 0.3 微摩尔叠氮化钠的去离子水中的无菌冷冻管中,温度为 4 摄氏度。

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Last updated: 18 July 2026