心肺复合体脱细胞：一种用于小鼠模型心脏和肺脏脱细胞的技术

脱细胞化可去除器官的细胞成分，同时保持细胞外基质（ECM）结构的完整性，从而有助于保留器官的三维结构。进行脱细胞化操作时，将已处死的小鼠仰卧放置，解剖小鼠并暴露心肺复合体。

结扎除主动脉和肺循环主要血管外的所有起源于心脏的大血管。此步骤可防止后续灌注过程中发生液体泄漏。在气管上创建一个开口，并通过该开口插入导管。从下方插管至降主动脉，直至导管到达主动脉弓。

缝合导管以固定其位置，并将其连接至灌注泵。使用去离子水开始灌注。通过主动脉灌注可有效清除整个心脏血管系统中的血液。最终，水流进入通向肺部的肺动脉。

完全清除肺血管中的血液后，停止水灌注，并替换为从温和到强效的不同去污剂溶液。该步骤可裂解细胞并释放细胞内成分，使心脏和肺呈现半透明状。

用去离子水再次灌注，以去除残留的洗涤剂分子。将脱细胞心肺复合体储存在含抗生素的溶液中，以确保较长的保存期限。

首先使用毛发剪刀剃除已处死小鼠的胸部、腹部和背部毛发，然后用70%乙醇对区域进行消毒。接着将小鼠固定于聚苯乙烯托盘上，伸展其前肢和后肢，以及头部和尾部，并将其置于显微外科显微镜下。

使用梅奥直剪，从下颌下区至下腹部做一皮肤切口，并进行皮下分离，暴露胸壁和腹膜。然后，使用显微外科剪沿胸壁两侧第六肋间隙剪开胸大肌和胸小肌。

用直剪刀沿之前的切口剪开胸骨。然后沿胸骨长轴剪开，完成胸骨切开术。将胸壁两侧抬起并用针固定，以暴露心肺复合体。使用圆头显微镊子轻轻牵拉胸腺及其周围脂肪组织，使其脱离附着处，再用显微剪刀切断食管。

使用锐利的显微镊子分离头臂静脉和头臂动脉。然后，将左侧颈总动脉和左侧锁骨下动脉从下方组织中分离出来，以便进行结扎和电凝。使用显微持针器、锐利的显微镊子以及9-0缝线，在头臂动脉发出左侧颈总动脉和左侧锁骨下动脉的上方位置缝合结扎。电凝头臂静脉。

使用显微剪刀切开韧带，以打开一个入口。将一根27号导管插入气管，并轻柔推进，直至气管分叉为支气管处，注意避免损伤支气管。使用6-0缝线，在气管周围缝合三针，以固定导管。

在第12胸椎水平处对小鼠进行截断。降主动脉位于脊柱腹侧，应在此处与脊柱一同截断。逆行插管进入主动脉，并推进导管直至到达主动脉弓。使用缝线，在导管尖端下方5毫米处开始，围绕主动脉放置四针缝线。

使用硅胶管和低位连接器将小鼠连接至灌注系统。以去离子水在每分钟 200 µL 的流速下灌注 15 分钟。随后，更换灌注液为用去离子水稀释的 0.5% 脱氧胆酸钠（DOC），并过夜灌注。次日，更换灌注液为用去离子水稀释的 0.1% 十二烷基硫酸钠（SDS），灌注 8 小时。然后用去离子水灌注 24 小时，以彻底洗去 SDS 和 DOC。

通过切断脱细胞心脏和肺与胸腔的连接，将其切除。将组织置于无菌冻存管中，加入去离子水，并含有1%青霉素-链霉素和0.3微摩尔叠氮化钠，在4摄氏度下保存。