0 次观看 • 3:38 分钟 • July 8th, 2025
小鼠舌背表面分布着三种主要的隆起状突起，称为舌乳头，即菌状乳头、轮廓乳头和丝状乳头。轮廓乳头（CVP）由容纳味蕾的上皮沟槽构成，其下方由一层结缔组织——固有层——提供支持。
为了分离CVP上皮，首先取一只仰卧位的安乐死小鼠。接着，切开颊部并解剖舌系带这一厚实的组织带，以将舌头与口腔底部分离。将切除的舌头转移至含有冷缓冲液的培养皿中。
接下来，切除舌的前部。将含有dispase和胶原酶的消化液小心地注射到CVP区域的上皮下间隙，即上皮与下方组织之间。在注射悬液至该区域的同时，缓慢撤出针头。
将舌组织置于适宜条件下孵育适当时间。Dispase和胶原酶可消化结缔组织中的细胞外基质蛋白，从而促进CVP上皮与组织的分离。孵育结束后，在CVP区域的上皮进行切口处理。
轻柔地将松解的上皮组织从下方组织分离。最后，将分离的CVP上皮转移至蛋白质包被的离心管中，以防止组织黏附管壁。CVP上皮可保存用于后续实验处理。
处死成年小鼠后，使用大型无菌解剖剪剪开面颊并折断下颌骨。然后抬起舌头，剪断舌系带以将舌头与口腔底部分离。将舌头完全切除，并收集到含有钙和镁的无菌冰冻 dPBS 中。
在解剖显微镜下，用刀片于磨牙间隆起前方稍作切割，移除并弃去舌前部。然后，使用精细擦拭纸清除舌后部的任何毛发和多余液体。
接下来，用200至300微升的消化酶溶液填充一支1毫升的注射器，将30号、1/2英寸的针头插入磨牙隆起上方，直至轮廓乳头（CVP）内侧稍下方。将酶溶液注射至CVP下方及其侧缘的上皮与下方组织之间。在注射过程中，缓慢且持续地从舌部撤出注射器。
将舌组织置于无菌的不含钙和镁的dPBS中，在室温下精确孵育33分钟。使用超细解剖剪刀，在轮廓乳头（CVP）前方两侧的上皮组织上做小切口。然后用精细镊子轻轻提起上皮，逐步剥离。一旦沟槽状上皮与下方结缔组织完全分离，立即将其放入预先用胎牛血清（FBS）包被的2毫升微量离心管中。