将微气泡注射到离体小鼠胚胎中:一种将微泡造影剂输送到活小鼠胚胎的脉管系统的技术

0 次观看6:10 分钟 • July 8th, 2025

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对于微泡递送,首先均匀悬浮内皮细胞靶向脂质壳微泡,其中包括连接到管道的注射器中的气态核心。

此组件装入注射泵并将玻璃针连接到管道上。现在,将表达特定内皮细胞受体的冷冻小鼠胚胎转移到放置在立体镜载物台上的培养皿中。

轻轻地将胚胎从卵黄囊和羊膜中取出。固定囊和胎盘边缘。用温缓冲液冲洗胚胎以恢复其血流。用预热的超声凝胶覆盖胚胎,以实现最佳的超声波传输。补充缓冲液以维持其生理状态。

使用注射泵小心地将微泡悬浮液以所需的流速注射到胎盘盘胎膜表面的合适静脉中。注入的微泡通过循环并与血管内壁内皮细胞上的特定受体结合。

使用超声换能器将高频超声波传输到胚胎。微气泡的高度可压缩气体核心使它们非线性振荡,散射频率与入射波不同的超声波。这些信号和组织的线性信号返回换能器。

换能器将它们转发到成像系统,该系统将微泡散射信号与组织信号区分开来,产生胚胎血管的对比增强超声图像。

液必要体积的微泡储备溶液,并加入等分试样的生理盐水中。用移液器的尖端轻轻搅拌混合。然后,使用 21 号针头将稀释的微泡溶液吸入干净的注射器中。取出针头后,消除注射器上的任何气泡并连接鲁尔和管子。慢慢地将溶液推到管道末端,确保不要产生任何气泡。

最后,将注射器插入注射器输液泵组,以每分钟 20 微升的速度分配微气泡,总体积为 20 微升。将拉动的玻璃针连接到管道末端。将泵移近注射台。使用穿孔勺子从冷冻培养皿中随机选择并取出一个胚胎。将胚胎放入位于立体镜下超声台上的解剖盘中。

接下来,找到胚胎中血管化最少的一侧。这是一个血管化程度低的区域,通常与头部区域相邻。然后,用细镊子切割或撕裂足够多的卵黄囊和羊膜,以便能够从内部取出胚胎,但不能更多。接下来,从胚胎周围轻轻移动囊。然后,将胚胎侧卧,胎盘和脐血管在前面。

使用小块橡皮泥稳定解剖盘。使用四个昆虫针,固定卵黄囊和胎盘边缘,避开任何主要血管。使用装有预热的 45 摄氏度 PBS 的注射器清洗胚胎,直到可以看到血液流入胚胎。脐动脉由搏动的鲜红色血液识别。脐静脉及其相关血管网络的血液颜色较深,通常覆盖在胎盘侧的脐动脉。

时,放置盘子,以便可以舒适地进行注射。胚胎复活后,用预热的超声凝胶覆盖它,但不要覆盖胎盘。使用细镊子轻轻地去除胚胎周围的任何气泡,并在培养皿中加入预热的PBS。在整个过程中,密切关注 PBS 和凝胶注射器中的溶液液位,并根据需要将备用注射器添加到加热烧杯中。

接下来,将玻璃针安装在解剖盘边缘的一个大橡皮泥球上,并将针端插入PBS。选择胎盘盘绒毛膜表面的静脉,尽可能远离主支。然后,用剪刀修剪针尖以匹配血管大小,以小角度切割针尖。使用弹簧剪刀的边缘去除玻璃的任何锯齿状边缘。

现在,使用注射泵,以每分钟 20 微升的速度将微泡溶液缓慢注入玻璃针中,直到所有空气从针尖排出,可以看到微泡自由流入 PBS。停止泵并将其重置为20微升的进样量。不要让空气进入注射针,以免将空气注入胚胎的血管系统。

玻璃针尖轻轻插入胎盘中选定的静脉,并确保其不动。摆动立体镜头并放置超声换能器,使胚胎均匀地位于 6 至 10 毫米的病灶之间。接下来,开始成像并开始推注微泡。一分钟后,进样完成后,启动数据采集步骤的计时器。

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最后更新:1 八月 2026