朗根多夫逆行心脏灌注：一种离体灌注小鼠离体心脏的技术

首先，将麻醉后的小鼠仰卧位固定于解剖板上。做切口以暴露胸腔并显露心脏。定位主动脉及其分支——左颈总动脉和头臂动脉。切断这些动脉以分离心脏。

立即把离体心脏浸入含有富营养且充氧的缓冲液的培养皿中。同时，将一根导管插入心脏，使其尖端到达升主动脉。使用缝线结扎固定导管。将导管连接至含有充氧灌注液的注射器。

将灌注液注入心脏。此步骤可使血液从冠状动脉流出，并从肺静脉渗出。接着，将插管的心脏连接至兰格多夫装置。使用蠕动泵以恒定流速进行灌注。

在这些条件下，缓冲液灌注进入心脏。这会产生套管压力，使主动脉瓣关闭，从而促使缓冲液流经冠状动脉。最终，缓冲液逆行灌注心肌，随后通过肺静脉流出。一个成功完成灌注的心脏现已准备好用于后续的下游应用。

处死一只8至10周龄的雄性C57BL/6小鼠后，使用组织镊提起剑突处的皮肤。然后用组织剪在皮肤上做一个小的侧向切口。在皮肤与筋膜之间进行钝性分离。将皮肤切口向两侧腋窝呈V形延伸，并继续切开肋骨 cage。

然后，使用组织镊夹住胸骨，并将肋骨向上掀开，以充分暴露心脏和肺。用弯镊剥离心包膜。如果胸腺覆盖了大血管，使用两把弯镊将胸腺向两侧撕开。接着，轻柔地将心脏基部向尾侧牵拉，直至主动脉及其分支动脉显现为Y形血管结构。

在左颈总动脉处横断主动脉，随后切断头臂动脉。取出心脏并立即浸入含有台氏液的培养皿中，以冲洗并排出残留血液。然后将心脏转移至另一含有溶液1的培养皿中。

在体视显微镜下，使用精细虹膜剪修剪任何多余的组织。将注射器中的气泡排出。然后，在两把直持针钳的协助下进行逆行主动脉插管，注意整个插管过程均需在液面下进行。调整插管深度，使插管尖端位于升主动脉内，注意避免刺破主动脉瓣。

然后，使用预先打结的3-0缝线将主动脉结扎固定于插管的凹槽处。用注射器缓慢注入溶液1，以冲洗残留的血液。接着，将插管后的心脏连接至Langendorff装置，注意避免将任何气泡引入心脏。在将插管后的心脏连接至Langendorff装置后，用溶液1灌注心脏约2分钟。