小鼠胚胎泌尿道亚甲蓝染料注射：一种评估泌尿道先天性梗阻的方法

为评估尿路梗阻，首先将围产期小鼠胚胎固定于仰卧位。随后解剖胚胎的腹腔，以定位已完全发育的尿路结构，该结构包括一对肾脏、输尿管以及一个共用的膀胱和尿道。

接下来，取一个连接着装有微针的导管的空注射器，将亚甲蓝溶液（一种深蓝色示踪染料）注入该装置中。将微针插入肾盂腔内——肾盂是肾脏中输尿管的漏斗状扩张近端——然后注入染料溶液。

由于静水压的作用，染料从肾脏的肾盂经输尿管流向，并最终积聚于膀胱腔内。对侧肾重复染料注射操作，以观察相应侧尿路的染料流动情况。

最后，使用配备相机的体视显微镜对泌尿道进行成像。成像时，通畅的泌尿道表现为膀胱染色深，而存在梗阻的异常泌尿道则限制了染料的自由流动。根据阻塞程度的不同，可观察到膀胱腔内染料完全或部分缺失。

使用镊子小心撕开胚胎的皮肤，以暴露其腹腔。然后，用镊子剪除或拔除肝脏、胃和肠道等多余器官和组织，从而暴露位于背部的肾脏、输尿管和膀胱。用无菌纱布吸去解剖后胚胎上的多余血液，随后继续进行染料注射。

通过静水压力将亚甲蓝溶液从针尖排出，以去除针头和管路中的气泡。将装有染料溶液的注射器抬高至针尖水平以上以启动液体流动，然后降低注射器以停止流动。接着，将针头插入靠近近端输尿管的肾盂部位，注意一旦放置到位后避免扰动。向肾脏内注射染料，以判断其尿路是否存在梗阻。

将针头准确插入肾盂是本检测成功的关键。针头应朝向输尿管插入肾盂，既不可穿过肾脏实质，也不可朝向血管方向。

将注射器抬高约20厘米，以提供静水压，使15至16微升的染料溶液流入。随后，观察染料的蓝色首先出现在肾盂，然后沿输尿管延伸，最后进入膀胱腔。放下注射器以停止染料流动，并将针头从肾脏中取出。在实验记录本中记录肾脏的肾积水情况、输尿管扩张情况以及染料溶液的最终位置。

最后，对侧肾进行注射，使染料总共流动20秒。使用连接于体视显微镜的相机和成像程序，拍摄被染料溶液标记的肾脏、输尿管和膀胱的图像。